Negativna podlaga, tehnika, prednosti in slabosti



The negativno barvanje Gre za posebno barvno metodo za poudarjanje prisotnosti kapsule pri nekaterih mikroorganizmih - predvsem Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae in Cryptococcus neoformans-, iz kliničnih vzorcev ali čistih kultur.

Neposredni vzorec, ki se pogosto uporablja za negativno obarvanje, je cerebrospinalna tekočina. Ta tehnika predstavlja hitro alternativo za predvideno diagnozo meningitisa, še posebej Cryptococcus neoformans.

Prav tako se lahko ta madež nanese na sputum in sterilne tekočine na splošno, kot tudi na seve, pridobljene iz mladih čistih kultur. Ta tehnika uporablja nigrozin ali kitajsko črnilo za njegovo izvedbo; zato je uporaba zelo preprosta in ekonomska metodologija, ki v kratkem času zagotavlja informacije velike diagnostične vrednosti.

V tem smislu lahko vsak laboratorij opravi to obarvanje. Seveda mora laboratorij imeti usposobljeno osebje, ki je sposobno prepoznati kvasovke Cryptococcus neoformans izločijo ali raztrgajo in jih ločijo od levkocitov in artefaktov, ki jih lahko predstavlja vzorec.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Tehnika
    • 2.1 Materiali
    • 2.2 Specifikacije za vzorčenje
    • 2.3 Izvajanje tehnike z neposrednimi vzorci
    • 2.4 Izvajanje tehnike s sevi iz kulture
    • 2.5 Opazovanje v mikroskopu
  • 3 Prednosti
  • 4 Pomanjkljivost
  • 5 Obarvanje tkiva z indijsko črnilom
  • 6 Reference

Fundacija

Nigrosine in indijsko črnilo delujejo na podoben način; zato se lahko katera koli od obeh snovi izmenično uporablja.

Ta tehnika se imenuje negativno barvanje, ker deluje v nasprotju s preostalimi tehnikami barvanja. V tem ostane neokrnjena struktura, ki jo iščemo ali jo želimo videti; to so mikroorganizmi.

Zato barvanje temelji na barvanju dna brisa v temni barvi. V tem scenariju bodo omejene strukture poudarjene v svetli ali brezbarvni barvi.

Na splošno so kvasovke opazne odbojne, obdane z jasnim halojem, ki ustreza kapsuli. To se zgodi, ker so kitajsko črnilo in nigrozin snovi, ki ne morejo prodreti v polisaharid, ki tvori kapsulo živih mikroorganizmov..

Treba je omeniti, da druge strukture, ki so lahko prisotne v neposrednem vzorcu, kot so levkociti ali rdeče krvne celice, ne prodrejo.

Zdaj, če so mikroorganizmi mrtvi, lahko tinktura prodre v njih, tako da je to obarvanje koristno tudi za oceno viabilnosti mikroorganizmov..

Tehnika

Materiali

Nigrosine

Nigrozin svoje ime dolguje črni barvi, ki jo ima. Gre za sintetično snov, ki se pridobiva s segrevanjem mešanice organskih spojin - kot so nitrobenzin, anilin in anilin hidroklorid - z uporabo katalizatorja (železa ali bakra) v omenjeni reakciji..

Kitajsko črnilo

Kitajsko črnilo je snov, ki jo uporabljajo predvsem Azijci za pisanje, izdelavo umetniških del in monokromatsko slikarstvo. Je zelo priljubljen v kitajski kulturi.

Pridobiva se iz črnila iz lignjev, pomešanega s prašnim premogom, produkta gorenja majhnih smolnatih dreves.

Prav tako ga je mogoče pripraviti iz saje pri sežiganju ogljikovodikov (rastlinskih olj), skupaj z beljakovinsko beljakovino, ki ji daje pravo konsistenco za preprečevanje obarjanja ogljikovih delcev..

Specifikacije za vzorčenje

- Ne zahteva posta.

- Vzorec CSF, sputuma ali sterilne tekočine mora vsebovati vsaj 1 ml volumna in ga je treba nemudoma prenesti na sobno temperaturo v laboratorij..

- CSF in sterilne tekoče vzorce mora vzeti specializirani zdravnik.

- Lahko je tudi čista kultura sumljivega seva, povezanega z omenjenimi patogeni.

Izvajanje tehnike z neposrednimi vzorci

- Vzorce je treba centrifugirati, nato se supernatant zavrže in sediment se vzame.

- Kapljico centrifugiranega materiala (usedline) in kapljico kitajskega črnila ali nigrozina postavimo na čisto steklo..

- Dobro jo je treba premešati in prekriti s pokrovčkom, ki omogoča, da se kapljica razprostre kot tanek film, ne da bi presegla robove.

- Nato se pripravek namesti v mikroskop.

- Če je pripravek preveč temen, ga lahko razredčite z vodo.

Izvajanje tehnike s sevi iz kulture

- Zelo majhno količino mladega pridelka vzamemo s iglo za sejanje in raztopimo v kapljici kitajskega črnila, ki je bilo prej nameščeno na čisto steklo..

- Na vrh je nameščen pokrivalo.

- Opažamo ga v mikroskopu pri 10X in nato pri 40 ° C.

Del kolonije lahko tudi raztopite v destilirani vodi in od tam vzamete kapljico in jo zmešate s črnilom. Na ta način priprava ne bo tako debela, da bo mogoče opazovati strukture v izolaciji; Če so aglomeracije, jih ne bomo dobro opazovali.

Druga metodologija je naslednja:

- Na eni strani preparata postavimo kapljico kulture v suspenzijo.

- Na isti konec postavimo kapljico nigrozina in premešamo.

- S pomočjo drugega diapozitiva vzemite vzorec, kot če bi delali hematološki razmaz.

- Pustite, da se posuši in opazujte pod mikroskopom.

Opazovanje v mikroskopu

Najprej se morate osredotočiti s ciljem 10X, da imate širok pogled na polje. Nato morate poiskati, če obstajajo jasni prostori; če obstajajo, se osredotočite s 40X, da vidite podrobnosti.

Prednosti

- Enostavno ga je izvajati.

- To je gospodarska tehnika.

- Ta metoda ne zahteva, da se razmaz pritrdi na toploto ali kemikalije; zato se mikroorganizmi opazijo brez izkrivljanja.

- Ni treba, da je svež pripravek posušen, zato ga je mogoče takoj opaziti in hitro doseči rezultate.

Pomanjkljivost

Ko so sveži pripravki sestavljeni, jih je treba takoj opaziti; Če se jim dovoli, da se posušijo, jih ni več mogoče opazovati in novega.

Obarvanje tkiv z indijsko črnilom

Druga funkcija, ki jo lahko izpolni kitajsko črnilo, je v patoloških laboratorijih. To se uporabi za kirurško odstranjene vzorce tkiva, da se označijo robovi resekcije tumorja.

Označeno tkivo se poškropi z ocetno kislino. To deluje kot lužilo in preprečuje, da bi se črnilo izločilo, ko je tkivo podvrženo rutinski obdelavi za pripravo biopsije..

Postopek je sestavljen iz kopanja tkiva v alkoholu in ksilenu, nato pa se vpije v parafinski vosek. Ta oznaka vodi patologa, ko opazuje tkivo, kar kaže, kje je meja kirurške resekcije ali druge zanimive točke.

Reference

  1. "Nigrosina". Wikipedija, Prosta enciklopedija. 11. julij 2017, 22:46 UTC. 6 januar 2019, 16:56: sl.wikipedia.org
  2. "Kitajsko črnilo". Wikipedija, Prosta enciklopedija. 1. okt. 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
  3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J in sodelavci. (2006). Osebje avtonomne skupnosti Extremadura. Posebna agenda Zvezek IV. Uvodnik MAD. Sevilla-Spain, str. 211-212.
  4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), specialistični laboratorijski tehnik, Galicijske zdravstvene službe (SERGAS). Vsebina specifični zvezek 2. Uvodnik MAD. Sevilla-Spain, str. 79-80.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik