Stain by May Grünwald-Giemsa temelj, tehnika in uporabe



The Majno madež Grünwald-Giemsa Pappenheim je tehnika diferenciranega barvanja, ki meša Giemsa in May Grünwald reagente. Uporablja se za diferenciacijo normalnih in nenormalnih krvnih celic v razmazih periferne krvi in ​​kostnega mozga, kot tudi za obarvanje histoloških oddelkov in citoloških vzorcev..

Oba reagenta - Gemsa in May Grünwald - sta izpeljana iz Romanowskega barvila, tehnike, ki temelji na kombinaciji kislin in osnovnih barvil.

Giemsa je izboljšala tehniko s stabilizacijo zmesi eozina, metilen modrega in njenih derivatov z glicerolom. Nasprotno pa May Grünwald uporablja eozin in metilensko modro z uporabo metanola kot topila. Ta strateška kombinacija je dala odlične rezultate.

Čeprav v smislu opazovanja morfologije celic deluje podobno kot barvila Giemsa in Wright, ta tehnika izboljša prejšnje z izboljšanjem obarvanosti parazitov, ki povzročajo malarijo, Chagasovo bolezen, leishmaniozo in trihomonijazo..

Poleg tega se je izkazalo, da je zelo uporabna tehnika za citološko študijo tekočine sperme. Poudarjena je ne le z morfološkimi značilnostmi sperme, temveč tudi z veliko učinkovitostjo omogoča razlikovanje levkocitov, epitelijskih celic in celic spermatogeneze..

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Različne barve
  • 2 Tehnika
    • 2.1 Materiali
    • 2.2 Koncentrirana barvna raztopina May Grünwald
    • 2.3 Koncentrirana barvila Giemsa
    • 2.4 Priprava pufrske raztopine pri pH 7,2
    • 2.5 Bris krvi ali postopek obarvanja kostnega mozga
    • 2.6 Razširjena tehnika barvanja sperme
    • 2.7 Pomembne specifikacije
  • 3 Uporabe
    • 3.1 Vaginalna citologija
    • 3.2 Vzorec semenčic
  • 4 Reference

Fundacija

Tehnika sledi temeljem madežev Romanowskyja, v katerih imajo kislinske barve selektivno afiniteto za celične osnovne sestavine in kisle komponente privabljajo osnovne barve.

Razloženo na drug način, tako celične strukture kot barvila imajo pozitivne ali negativne električne naboje; enaki stroški se odbijajo in privabljajo različne dajatve.

Na primer, osnovne barve, kot je metilen modro, so pozitivno nabite in jih privlačijo negativno nabite strukture. Zato to barvilo obarva jedra, ki so bogata z DNA in RNA, ki imajo negativno nabite fosfatne skupine.

Granule segmentiranih bazofilcev in citoplazme mononuklearnih belih krvnih celic, ki vsebujejo RNA, so prav tako obarvane..

Prav tako kislinsko barvilo nosi negativni naboj, zato se združi v pozitivno nabite strukture, kot so eritrociti in granule segmentiranih eozinofilcev. Kar zadeva granulate segmentiranih nevtrofilcev, ti fiksirata obe barvili.

Raznolikost barvil

V tej tehniki obstajajo kombinacije reakcij med ortokromatskimi barvili in metakromatskimi snovmi. Ortohromati (eozin in metilen modro) se vežejo na celično strukturo, s katero so povezani, in zagotavljajo stabilno barvo, ki se ne spreminja..

Po drugi strani metahromatske spojine (derivati ​​metilensko modrega azurna A in azurna B) spreminjajo svojo prvotno barvo, ko so vezane na specifično strukturo, in lahko imajo celo različne odtenke..

Končno, korak, ki ga je izvedla majska rešitev Grünwald, zahteva prisotnost vode, saj bo brez njega barva prodrla v strukture, vendar ne bo fiksirana. Da bi se to zgodilo, mora barva postati polarna ali ionizirana in se tako lahko oboriti in pripeti na sorodne strukture.

Tehnika

Materiali

- Diapozitivi za diapozitive.

- Barvni mostovi.

- Rešitev May-Grünwald.

- Giemsa madež.

- Destilirana voda.

Koncentrirana barvna raztopina May Grünwald

Tehtamo 0,25 g eozin-metilen modre barve (barvilo po May Grünwald) in raztopimo v 100 ml metanola. Zmes nato mešamo 1 uro in pustimo stati 24 ur. Končal je čas, filtrira.

Za uporabo tehnike je treba barvilo May Grünwald razredčiti na naslednji način: za 200 ml razredčene barve se izmeri 30 ml koncentrirane raztopine, doda se 20 ml pufrske raztopine in 150 ml destilirane vode na pH 7,2-7,3. . Nato se zmeša in filtrira.

Koncentrirana barva Giemsa

Natehtamo 0,5 g azur-eozin-metilen modre barve (barvilo po Giemsi), raztopimo v 50 ml metanola in v mešanico damo 50 ml glicerina..

Za izvedbo tehnike razredčite 1:10 s pufersko raztopino in pustite počivati ​​10 minut. Po potrebi se lahko filtrira.

Priprava pufrske raztopine pri pH 7,2

Tehtati jih je treba:

- 40 mg kalijevega hidrogenfosfata (KH2PO4).

- 151 mg di-natrijevega hidrogen fosfata 12-hidrata (Na2HPO4).

Obe spojini raztopimo v 100 ml vode.

Bris krvi ali postopek obarvanja kostnega mozga

Obstajata dva načina: klasičen in hiter.

Klasični način

  1. Razlito maso prekrijte 2 ali 3 minute z razredčeno raztopino May-Grünwald.
  2. Za odstranitev predhodne raztopine izperemo z destilirano vodo v pufru.
  3. Pokrijte z isto pufersko raztopino za pranje in pustite 1 minuto. Zamisel je, da je prejšnja barva pritrjena na strukture in da so celice hkrati hidrirane.
  4. Na pufrano vodo dodamo 12 kapljic razredčene tinkture Giemsa, ki jo premešamo in homogeniziramo. Pustite stati 15 ali 20 minut.
  5. Razlite umazanijo z destilirano vodo v pufru in posušite na zraku.
  6. Osredotočite se in opazujte v optičnem mikroskopu krvne celice, obarvane z uporabo 40X cilja. Po potrebi lahko uporabite 100X.

Hitri način

  1. Razlito maso prekrijemo z 1-minutnim razredčenim barvilom May Grünwald.
  2. Operite z destilirano vodo z vdolbino.
  3. Pokrijte z vodno pufro in pustite stati 1 minuto.
  4. Razredčeno barvo Giemsa postavite na 5 minut.
  5. Operite z destilirano vodo v pufru in pustite, da se posuši na zraku.

Tehnike, opisane tukaj, so vodilo, vendar je treba upoštevati, da se postopki in časi barvanja razlikujejo glede na komercialno hišo, ki dobavlja reagente. Priporočljivo je, da sledite korakom, ki jih vsaka poslovna hiša strogo označuje.

Tehnika podaljševanja barve sperme

1. Razmažite raztopino s tankim slojem raztopine May Grünwald 4 minute.

2. Odstranite barvo in operite z destilirano vodo.

3- 15 minut postavite plast razredčene Giemsa (1:10) v destilirano vodo.

4. Odstranite barvo in operite z destilirano vodo.

5. Pustite, da se posuši in opazujte pod mikroskopom.

Pomembne specifikacije

Tehnika zahteva, da imajo reagenti in pralne raztopine pH prilagojen na 7,2-7,3, tako da afinitete barvil za celične strukture ne izkrivljajo in se ne spreminjajo pričakovane končne barve..

Uporabe

To metodo uporabljajo klinični laboratoriji za obarvanje razmazov periferne krvi in ​​kostnega mozga, tkivnih odsekov in citologij..

Na hematološkem področju je ta tehnika ključnega pomena za preučevanje nenormalnosti celic glede oblike, velikosti in števila. Je zelo dragoceno orodje za diagnozo nekaterih bolezni, kot so levkemija in anemija.

Poleg tega predstavlja izjemno koristnost pri iskanju parazitov na hematoloških poljih (Plasmodium sp in Trypanosoma cruzi) ali histološko (Leishmanias sp).

Vaginalna citologija

Kar zadeva vaginalno citologijo, je ta tehnika še posebej ugodna za opazovanje Trichomonas vaginalis. To je pomembna ugotovitev, saj njena prisotnost simulira slike karcinoma in situ ki nato izginejo, ko se parazit izloči.

Vzorec sperme

Je idealno orodje za proučevanje vzorcev sperme, saj zagotavlja dragocene informacije o kakovosti sperme.

Podatki, ki jih ponuja, se nanašajo predvsem na število in morfologijo, kot tudi na sočasne celice, ki so lahko prisotne in ki so bistvenega pomena, kot so zarodne celice, levkociti in epitelijske celice..

S to analizo je mogoče opisati nenormalnosti v spermi v glavi, vratu, srednjem delu in glavnem delu..

Poleg tega lahko pomagajo tudi pri prikazu primerov hemospermije (prisotnost rdečih krvnih celic v spermi) in levkospermije ali piospermije (povečanje števila levkocitov v semenu)..

Reference

  1. Costamagna S, Prado M. Potrditev svežega testa, May Grünwald-Giemsa in barve Gram in gojišča za diagnosticiranje Trichomonas vaginalis. Parazitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Na voljo v jeziku: scielo.
  2. Merckov KGaA laboratorij. Naj bo Grünwald eosin metilen modro za mikroskopijo.
  3. "Mrvica May-Grünwald-Giemsa." Wikipedija, Prosta enciklopedija. 15. november 2018, 14:37 UTC. 8 Jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratorijske kemikalije za steklo Panreac. Reagenti za histološke tehnike, hematologijo in mikrobiologijo. Na voljo na: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Priporočilo za obarvanje krvnih razmaz za branje krvne slike. Nacionalni in referenčni biomedicinski laboratorij. Inštitut za javno zdravje Čila.
  6. Sarabia L. Spermiogram po merilih WHO. Program anatomije in biologije razvoja. Medicinska fakulteta Univerza v Čilu Na voljo na: pp.centramerica.com