Kinyoun temelj barve in tehnike



The Kinyoun barvanje Gre za barvno tehniko, ki se uporablja za obarvanje bakterij in kislinskih parazitov. Nastal je zaradi spremembe barve Ziehl-Neelsen; Obe tehniki se razlagata na enak način, vendar se razlikujeta v dveh elementih: pri pripravi glavnega reagenta in v tem, da tehnika Kinyoun ne uporablja toplote..

Zaradi tega je znana tudi kot hladno modificirano Ziehl-Neelsen ali Kinyoun hladno barvanje. Navedeno je za barvanje Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atipične mikobakterije, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris in Cyclosporas cayetanensis.

Omeniti je treba, da Nocardias s to tehniko slabo obarva, saj so alkohol, ki je delno kislinsko odporen, zato za ta žanr obstaja modifikacija metodologije..

Hladna tehnika Kinyoun je bila združena s trikromno tehniko, ki jo je Didier spremenil za odkrivanje kokcidij (Cryptosporidium parvum e Isospora belli) in spore mikrosporidije (Enterocytozoon bieneusi in Encephalitozoon intestinalis).

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Tehnika
    • 2.1 Materiali
    • 2.2 Priprava kinyoun fenicirane fuksine
    • 2.3 Priprava alkoholne kisline
    • 2.4 Priprava kontrastnega barvila z metilensko modro barvo
    • 2.5 Tehnika madežev s kinyunom
    • 2.6 Posebna tehnika kinunja za nokardije
    • 2.7 Kombinirana tehnika fenolnih in trikromnih fuksinov, ki jo je spremenil Didier
    • 2.8 Nadzor kakovosti
  • 3 Kinyoun tehnika v primerjavi s tehniko Ziehl -Neelsen
  • 4 Referenca

Fundacija

Glavni reagent za barvanje je karbol fuksin ali fuksin fenicada, ki se veže na karbolne kisline, obstoječe v steni voščene celice, bogato z lipidi (mikolične kisline) mikobakterij in nekaterih parazitov..

Te zveze ne preprečuje razbarvanje kisline; zato so mikroorganizmi opredeljeni kot alkohol, odporen na kislino.

Za razliko od tehnike Ziehl-Neelsen - ki fiksira barvo s toploto - v tehniki Kinyoun ta korak ni potreben, ker fenolna raztopina fuksina, pripravljena za to tehniko, vsebuje visoko koncentracijo fenola..

Fenol raztopi lipidni material celične stene, kar omogoča vstop barvila karbusa. Ko barva prodre, ostane fiksna kljub pranju z alkoholno kislino.

Na ta način kislinsko odporni mikroorganizmi prevzamejo značilno rdečo barvo, vse, kar ni kislinsko odporni alkohol, pa se obarva in obarva modro..

Tehnika

Materiali

- Modificiran fenolni fuksin.

- Alkoholna kislina.

- Metilen modra.

Priprava Kinyoun fenicirane fuksine

- Osnovna fuksin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destilirana voda: 100 ml.

Osnovni fuksin v alkoholu je treba počasi raztopiti, neprestano mešati. Nato se kristalizirani fenol tali v vodni kopeli pri 56 ° C. Ko se raztopina zgoraj raztopi, dodamo 8 ml raztopine fuksina.

Priprava alkoholne kisline

- Koncentrirana klorovodikova kislina: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Meriti ga je treba, združevati in mešati.

Priprava metilen modrega kontrastnega barvila

- Metilen modra: 0,3 g.

- Destilirana voda: 100 ml.

Nato se stehta in raztopi.

Tehnika madežev s kinyunom

1 - Pripravite bris neposredno iz vzorca, ki je lahko med drugim pljučnica, pljučna tekočina, usedlina v urinu, cerebrospinalna tekočina ali blato; ali iz suspenzije mikroorganizmov, pridobljenih iz čistih kolonij, razvitih v primarnem gojišču.

2- Popravite razmaz s toploto.

3. Postavite razmaz na barvni most in ga pokrijte s pripravljenim Kinyounovim fenolnim fuchsin reagentom. Pustite, da sedi 3 ali 5 minut.

4- Pranje z destilirano vodo.

5 - 3 minute z belim kislinskim alkoholom in ponovno spiranje z destilirano vodo.

6. Ponovno belite z kislim alkoholom 1 ali 2 minuti, dokler se ne vleče več barvila.

7. Operite z destilirano vodo in pustite, da drenažo postavite v pokončni položaj.

8. Pripravo prekrijemo z metilensko modro in pustimo 4 minute.

9- Operite z destilirano vodo in pustite, da se zrak posuši.

10. Preglejte na 40X in nato na 100X.

Če želite izboljšati in pospešiti obarvanje kislih mikroorganizmov, dodajte 1 kapljico omočilnega sredstva (kot je tergitol št. 7) v 30 ali 40 ml Kinyoun-ovega fenolnega fuksina..

Nekateri laboratoriji spremenijo barvilo za kontrast metilen modre barve za svetlo zeleno ali pikrinsko kislino; prva daje zeleno barvo ozadju, druga pa rumeno barvo.

Tehnika Kinyoun posebna za Nocardias

Za izboljšanje obarvanja bakterij Nocardia se uporablja modifikacija obarvanja s kinyunom. Tehnika je naslednja:

1 - Pokrijte razmaz s Kinyoun fenicated fuchsin za 3 minute.

2. Operite z destilirano vodo.

3- Kratko beljenje s 3% pripravljenim kislinskim alkoholom, dokler ni več barvila.

4. Ponovno sperite z destilirano vodo.

5. Pripravo prekrijemo z metilensko modro in pustimo stati 30 sekund.

6. Operite z destilirano vodo in pustite, da se zrak posuši.

Kombinirana tehnika fenolnih in trikromnih fuksinov, ki jo je spremenil Didier

Ta tehnika je priporočljiva za analizo vzorcev blata v iskanju kokcidij in spore Microsporidium sp hkrati Postopek je naslednji: \ t

1 - Pokrijte razmaz s Kinyoun fenolnim fuksinom 10 minut.

2. Odstranite barvo in operite z destilirano vodo.

3- beljenje 30 sekund z alkoholno klorovodikovo kislino.

4. Ponovno sperite z destilirano vodo.

5. Raztopino s trihromno raztopino prekrijemo 30 minut pri 37 ° C.

6. Operite z destilirano vodo.

7. Razbarvajte 10 sekund z alkoholno ocetno kislino.

8- Izpirajte razmaz 30 sekund s 95% etanolom.

Nadzor kakovosti

Kot pozitivno kontrolo se razmaz pripravi s sevi. \ T Mycobacterium tuberculosis in obarvani s pripravljenimi reagenti, da se preveri, ali bakterije vzamejo pravo barvo (rdeče-fuksija).

Negativne kontrole se lahko uporabijo tudi pri pripravi razmazov s katerim koli sevom, ki ni kislinsko odporen alkohol, s čimer se potrdi, da je celoten vzorec barve kontrasta.

Kinyoun tehnika v primerjavi s tehniko Ziehl -Neelsen

Tehnika Kinyoun je enostavnejša, ker odpravlja stopnjo ogrevanja, vendar je njena glavna prednost ta, da preprečuje emisije hlapov, zelo strupene in dolgoročno povzroča raka. Zato je Kinyoun barvanje varnejše za obarvanje osebja.

Pomembno je upoštevati, da je treba paziti, da reagenti ne pridejo v neposreden stik s kožo, saj so jedki in belilo je vnetljivo..

V zvezi s slabostmi negativni razmaz ne pomeni nujno, da mikroorganizem ni prisoten. Poleg tega lahko prisotnost celičnega detritusa povzroči napačne pozitivne rezultate, kar povzroča zmedo pri diagnozi.

Referenca

  1. Applied Clinical Chemistry (2016). Komplet BK Kinyoun, na voljo na: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun madež in dve Coccidiji pri HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana S.A..
  5. Prispevki Wikipedije. "Kinyoun madež." Wikipedija, svobodna enciklopedija. Wikipedija, Svobodna enciklopedija, 8. februar 2018. Splet. 5. januar 2019.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Izvajanje tehnike obarvanja za sočasno diagnozo Coccidia in Microsporidia. Inštitut za higieno Univerze v Republiki. Montevideo. Urugvaj Na voljo na: higiene.edu.uy