Tetrathionatna osnova, pripravek in uporaba



The tetratacijska juha ali TT bujon je selektivno tekoče gojišče za obogatitev in obnovitev sevov salmonele. Ustvaril jo je Müeller in kasneje spremenil Kauffmann, zato so tisti, ki ga imenujejo juha Müeller-Kauffmann.

Prvotni medij je vseboval proteozne peptone, kalcijev karbonat in natrijev tiosulfat. Kauffmann je dodal žolčne soli in ustvaril drugo modalnost s svetlo zeleno. Te snovi zavirajo rast koliformnih bakterij, ki pustijo prosti medij za razvoj patogenih bakterij, v tem primeru salmonele..

Sprememba je bila zelo uspešna, ker je občutno povečala občutljivost medija. Zato je trenutno uporaben za iskanje salmonel v vseh vrstah vzorcev, zlasti pa za trde ali tekoče iztrebke in hrano..

Njena priprava je sestavljena iz dveh faz; komercialni medij je osnova za pripravo tetrationatne brozge in nato za tvorbo tetrationata dodamo jodirano raztopino joda, da dopolnimo medij..

Ameriško združenje za javno zdravje (APHA) priporoča uporabo tetionatne juhe, ki je dopolnjena z svetlo zeleno za obogatitev vzorcev v iskanju salmonele, ker je bolj selektivna kot tetrationatna juha in selenitna juha.

Na splošno je tetrationatna juha idealna, kadar obstaja sum, da so bakterije iz rodu Salmonella v majhnih količinah ali da so zlorabljene zaradi izpostavljenosti inhibitornim snovem ali industrijskim procesom, ki zmanjšujejo njihovo sposobnost preživetja..

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
    • 2.1 - tetrationat
    • 2,2-Variante tetrionatna juha z svetlo zeleno
  • 3 Uporabite
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Priporočila
  • 6 Reference

Fundacija

Pričujoči peptoni ustrezajo kazeinskim prebavilom trebušne slinavke in peptični razgradnji živalskega tkiva. Ti zagotavljajo vir ogljika, dušika in hranil na splošno za rast bakterij.

Natrijev tiosulfat reagira z jodirano raztopino in tvori tetrationat. To zavira rast koliformnih bakterij in spodbuja razvoj bakterij, ki vsebujejo encim tetrationatno reduktazo, med njimi je rod Salmonella, pa tudi Proteus.

Žolčne soli delujejo tudi kot inhibitorna snov večine Gram-pozitivnih bakterij in nekaterih gram-negativnih bakterij (koliformnih bakterij)..

Kalcijev karbonat absorbira strupene snovi, ki nastanejo pri razgradnji tetrationata, ki tvori žveplovo kislino. V tem smislu kalcijev karbonat nevtralizira kislino, ki ohranja pH stabilnega medija.

V primeru svetlo zelene modalitete ta snov poveča selektivno moč tetrationatne juhe z zaviranjem drugih mikroorganizmov, razen rodu Salmonella..

Priprava

-Tetrirajte juho

Jodova raztopina joda

Tehtanje:

  • 6 g joda.
  • 5 g kalijevega jodida.

Kalijev jodid se raztopi v približno 5 ml sterilne destilirane vode, nato pa se jod dodaja malo po malo, medtem ko se zmes segreje. Ko se popolnoma raztopi, jo napolnimo s sterilno destilirano vodo, dokler ne doseže končnega volumna 20 ml.

Polovična baza za tetrationatno juho

Stehtamo 46 gramov dehidriranega medija in suspendiramo v 1 litru sterilne destilirane vode. Zmešamo in segrevamo, dokler se popolnoma ne raztopi, lahko vre le nekaj minut. Ne sterilizirajte v avtoklavu. Osnovo medija pustimo ohladiti na približno 45 ° C in v tem času dodamo 20 ml jodirane raztopine..

Po dodajanju raztopine je treba jodurado uporabiti takoj. Če ne želite uporabiti celotne zmesi, storite naslednje:

10 ml osnovnega medija se porazdeli v epruvete in dodamo samo 0,2 ml jodirane raztopine tistim, ki jih bomo inokulirali z vzorci..

Tisti, ki se ne bodo uporabljali, se lahko še vedno hranijo v hladilniku, toda ker medij ni steriliziran, je idealen za pripravo natančnega potrebnega zneska..

Barva medija pred dodajanjem jodirane jodove raztopine je mlečno bela z belo oborino in po dodajanju je rjava z gosto oborino. Opazovana oborina je normalna in ustreza kalcijevemu karbonatu, ki se ne raztopi. Končni pH medija je 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionate juhe varianta z svetlo zeleno

Za pripravo tetrationatne brozge z svetlo zeleno izvedemo vse zgoraj opisane korake, toda dodatno dodamo 10 ml svetlo zelene raztopine, pripravljene pri 0,1%, v mešanico..

Svetlo zelena

Ta raztopina se pripravi na naslednji način: \ t

Stehtamo 0,1 g svetlo zelene barve in suspendiramo v 100 ml destilirane vode. Segrejemo do vrelišča, da dosežemo popolno raztapljanje. Shrani v jantarno steklenico.

Uporabite

Za vzorce blata (kultura blata) je protokol naslednji:

Inokulirajte 1 g trdnega blata ali 1 ml tekočega blata v epruveti z 10 ml pripravljene tetrationatne juhe. Močno stresamo in inkubiramo v aerobiozi pri 43 ° C 6-24 ur.

Nato vzemite alikvot 10 do 20 μl juhe in ga subkulturirajte v medij, selektiven za salmonelo, kot je SS agar, XLD agar, svetlo zelen agar, Hektoen enterični agar..

Vzporedno je treba selektivne medije za salmonelo inokulirati z neposrednim vzorcem (blatom) brez obogatitve. Za vzorce brisov rektuma prenesite zbrani material v epruveto in nadaljujte, kot je opisano zgoraj.

Za vzorce hrane stehtajte 10 g trdne hrane ali 10 ml tekoče hrane in steklenico nacepite s 100 ml pripravljene tetrationatne juhe. Nadaljujemo na enak način, kot je opisano zgoraj, vendar inkubiramo pri 37 ° C.

Kot lahko vidimo, bo razmerje med vzorcem in brozgo vedno 1:10.

Nadzor kakovosti

Za preskušanje gojišča lahko uporabimo znane kontrolne seve. Najpogosteje uporabljeni sevi so ATCC.

Sevi, ki se bodo uporabljali, so Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 in Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Pri sevih salmonele pričakujemo odličen razvoj, medtem ko. \ T Escherichia coli imajo lahko šibek ali pravilen razvoj, in po Gramu pozitivni sevi (Enterococcus in Staphylococcus) so delno ali popolnoma \ t.

Priporočila

-Ker ta medij ne zavira rasti proteusa, nekateri laboratoriji uporabljajo 40 mg / l novobiocina, da preprečijo razvoj tega mikrobnega seva. Antibiotik je treba dodati pred raztopino jodiranega joda.

-Po pripravi gojišča, ki vsebuje jodirano raztopino joda, ne sme biti več kot 2 uri po inokulaciji.

-V trenutku razdeljevanja medija v epruvete je treba mešanico neprekinjeno homogenizirati, da nastalo oborino resuspendiramo.

-V manj kontaminiranih vzorcih se tetrationatna bujon inkubira pri 35-37 ° C, v močno kontaminiranih vzorcih pa se priporoča inkubacija pri 43 ° C..

Reference

  1. Laboratorij Conda Pronadisa. 2010. Podlaga tetrationatne juhe po Müeller-Kauffmannu. Na voljo v:
  2. BD Laboratories 2003. Tetrathionate broth Base. Na voljo v:
  3. Laboratoriji Britania. 2015. Osnova tetionatne juhe. Na voljo v:
  4. Mediji BBL. 2005. Pripravki cevi za gojenje Salmonella vrst.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Primerjava med gojiščem natrijevega selenita in tetrationata natrija, inkubiranega pri 37 ° C in 42 ° C izolacijo Salmonella spp nosilnega blata. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220