Sojina bujon tripticaseína podlaga, priprava in uporaba



The sojina juha tripticaseína Je tekoče gojišče, zelo hranljivo in neselektivno. Zaradi velike vsestranskosti je ena izmed najbolj razširjenih tekočih kulturnih medijev v mikrobiološkem laboratoriju.

Znana je tudi kot sojina juha tripticasa ali prebavljena kazein-soja, katere okrajšava je TSB za akronim v angleščini Triptik sem Broth ali CST za akronim v španščini. Njegova uporaba je zelo raznolika zaradi svoje sestave. Sestavljen je iz tripteina, sojinega peptona, natrijevega klorida, dikalijevega fosfata in glukoze.

Sposoben je razmnoževati klinično pomembne patogene bakterije, vključno s tistimi, ki so prehransko zahtevne in anaerobne bakterije. V tem okolju se lahko razvijejo tudi nekatere oportunistične glivice in kontaminanti.

Zaradi visoke hranilne moči ima visoko občutljivost za zaznavanje mikrobne kontaminacije, zato jo je za mikrobiološko analizo cepiv izbrala USDA Inšpekcijska služba za živali in rastline..

Tudi sojina juha s tripticazami izpolnjuje zahteve različnih farmakopej (evropski EP, japonski JP in severnoameriški USP) za mikrobiološko preučevanje izdelkov na industrijski ravni, kot so kozmetika in hrana..

Po drugi strani pa je vredno omeniti, da je ta medij kljub svoji koristnosti relativno poceni, zato je dostopen za večino mikrobioloških laboratorijev. Prav tako je zelo enostavno pripraviti.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
    • 2.1 Sojina tripticamina
    • 2.2 -Variants iz sojinega bujona triptikaseina
  • 3 Uporabite
  • 4 Seeded
  • 5 Nadzor kakovosti
  • 6 Omejitve
  • 7 Reference

Fundacija

Tripteína, pepton in glukoza mu zagotavljajo bistvene hranilne lastnosti, ki jih spreminjajo v idealen medij za hiter razvoj mikrobov..

Približno 6 do 8 ur inkubacije je že vidna rast v večini mikroorganizmov. Vendar pa obstajajo počasi rastoči sevi, ki lahko trajajo več dni, da rastejo.

Natrijev klorid in dikalijev fosfat delujeta kot osmotsko ravnovesje oziroma regulator pH. Prisotnost rasti dokazuje pojav motnosti v mediju; če ni rasti, ostane medij prosojen.

Zaradi svetle barve je mogoče opazovati proizvodnjo pigmentov, kot je tisti, prikazan na sliki na začetku izdelka, kar ustreza pigmentu, ki ga proizvaja Pseudomonas aeruginosa. 

Priprava

-Triptična sojina juha

Za pripravo sojinega bujona tripticase, stehtajte 30 gramov dehidriranega komercialnega medija v digitalnem merilu. Nato se raztopi v litru destilirane vode v fioli.

Zmes pustimo stati 5 minut in jo nato spravimo v vir toplote, da pomagamo pri raztapljanju medija. Med vretjem jo morate stresati pogosto 1 minuto.

Ko se raztopi, se po potrebi razporedi v epruvete ustrezne velikosti. Uporabite lahko cevi z bombažnim čepom ali bakelitnimi kape. Nato epruvete steriliziramo z medijem v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

PH medija mora biti 7,3 ± 0,2

Upoštevati je treba, da je barva dehidriranega gojišča lahka bež in jo je treba shranjevati pri 10 do 35 ° C na suhem mestu. Medtem ko je pripravljena juha svetlo rumena, in jo je treba shraniti v hladilniku (2 do 8 ° C).

-Različice sojinega bujona triptikaseina

Tripticaminsko modificirano sojino juho lahko pripravimo z dodajanjem žolčnih soli in novobiocina, da postane selektiven za izolacijo E. coli. Druga možnost za isti namen je priprava sojinega bujona tripticase, dopolnjenega z vankomicinom, cefiximom in teluritom (2,5 μg / ml)..

Po drugi strani pa lahko večjo količino glukoze (0,25%) dodamo sojinemu bujonu tripticaseina, kadar je cilj spodbujati tvorbo biofilma..

Uporabite

Je dovolj hranljiva, da omogoča rast zahtevnih ali motečih bakterij, kot je npr Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp in Brucella sp, ni potrebno dopolnjevati s krvjo ali serumom.

Prav tako se lahko razvijejo nekatere glivice v tej juhi, kot npr Kompleks Candida albicans, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Poleg tega je ta medij v anaerobnih pogojih idealen za obnavljanje bakterij, ki spadajo v rod Clostridium, kot tudi za anaerobne ne-sporulirane bakterije kliničnega pomena..

Če se doda 6,5% natrijevega klorida, lahko uporabimo za rast Enterococcus in druge Streptococcus skupine D.

Na ravni raziskav je bila zelo uporabna v različnih protokolih, zlasti pri proučevanju bakterij, ki tvorijo biofilme ali biofilme. Uporablja se tudi za pripravo bakterijske suspenzije pri 0,5% Mac Farlanda, ki je potrebna za izvajanje antibiograma po metodi Kirbyja in Bauerja..

V tem primeru se vzame 3 do 5 kolonij podobnega videza in emulgira v 4-5 ml sojinega bujona tripticaseina. Nato inkubiramo 2 do 6 ur pri 35-37 ° C in nato s sterilno slanico nastavimo na želeno koncentracijo. Tripticase sojine juhe ne smete uporabljati 18 do 24 ur inkubacije.

Poseljeno

Vzorec se lahko poseje neposredno ali subkulturno čistih kolonij, vzetih iz selektivnih medijev. Inokulum mora biti majhen, da se medij ne inkubira pred inkubacijo.

Običajno 24 ur inkubiramo pri 37 ° C v aerobiozi, toda ta stanja se lahko razlikujejo glede na želeni mikroorganizem. Lahko se tudi inkubira v anaerobnih pogojih pri 37 ° C, če je potrebno. Na primer, v zahtevnih ali počasi rastočih mikroorganizmih lahko inkubiramo do 7 dni.

V mikrobiološki analizi farmacevtskih snovi, kot so cepiva, so protokoli strožji. V teh primerih se juha brez rasti ne zavrže, dokler ne doseže 14 dni neprekinjene inkubacije.

Nadzor kakovosti

Za vsako pripravljeno serijo je treba inkubirati 1 ali 2 epruveti brez inokulacije, da se dokaže sterilnost. Ostati mora nespremenjena.

Lahko tudi posadite znane seve, da ocenite njihovo vedenje. Med sevi, ki se lahko uporabljajo, so: \ t

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ali 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

V vseh primerih mora biti rast zadovoljiva v pogojih atmosfere in temperature, ki je primerna za vsak mikroorganizem.

Omejitve

-Fermentacija glukoze povzroča zmanjšanje pH medija s proizvodnjo kislin. To je lahko neugodno za preživetje nekaterih mikroorganizmov, ki so občutljivi na kislost.

-Ni priporočljivo za vzdrževanje sevov, saj bakterije poleg kislosti po nekaj dneh izčrpavajo hranila s posledično kopičenjem strupenih snovi, zaradi katerih je okolje negostoljubno..

-Pri vseh protokolih sterilnosti je treba paziti, ker so juhe zlahka kontaminirane.

-Po pripravi triptikasein sojine mesne juhe ne poskušajte prenesti v drugo sterilno epruveto, ker je ta vrsta manevrov zelo občutljiva na kontaminacijo..

Reference

  1. Cona E. Pogoji za dobro študijo občutljivosti s testom difuzije agarja. Rev. chil. infectol 2002; 19 (2): 77-81. Na voljo na: scielo.org
  2. Britanski laboratorij Trikotna sojina brozga. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  3. Laboratorij MCD. Trytica sojina juha. Na voljo na: electronic-systems.com
  4. Neogen laboratorij. Soy Broth Triptych. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Ocena tehnike magnetnega imunskega ločevanja za obnovitev Escherichia coli O157: H7 v mlečnih kremah. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Na voljo na: scielo.org.ve
  7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Oblikovanje biofilma v izolaciji Staphylococcus aureus glede na antimikrobno občutljivost in klinični izvor. Vitae 2015; 62 (1): 1-8. Na voljo na: saber.ucv.ve
  8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolacija Escherichia coli O157: H7 v vzorcih blata dvojne goveje govedi iz občine Miranda, država Zulia, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Na voljo na: scielo.org