Temelj, pripravek in uporaba selenitne juhe



The juha iz selenita Je selektivno tekoče gojišče. Oblikoval jo je Leifson za obogatitev vzorcev, kjer obstaja sum prisotnosti enteropatogenih bakterij iz rodu Salmonella..

Ta medij ustreza zahtevam Ameriškega združenja za javno zdravje (APHA) in je zato sprejet med drugim za preiskovanje prisotnosti salmonele v vzorcih blata, urina, tekočine ali trdne hrane, vode..

Kemična sestava, ki jo ima, daje prednost predelavi teh mikroorganizmov in s tem zavira rast drugih. Večinoma je toksičen za večino bakterij iz družine Enterobacteriaceae. Vendar pa omogoča tudi obnovitev sevov zdravila Shigella in ne zavira rasti Pseudomonas in Proteus..

Sestavljen je iz brezvodnega natrijevega selenita, brezvodnega natrijevega fosfata, peptonov in laktoze. Obstaja tudi varianta, ki ji je dodan cistin, od tod tudi njegovo ime selenit-cistinska brozga.

Trenutno je prednost rabe selenit-cistinske brozge, ker je dosežen višji odstotek obnovitve salmonele, ki je enakovreden tistemu, ki ga opazimo pri drugih selektivnih medijih z enakim namenom, kot je natrijeva brozga Tetrathionate..

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
    • 2.1 - Selena
    • 2.2 Priprava komercialnega medija
    • 2.3 Variantna selenit-cistinska brozga
  • 3 Uporabe
  • 4 Seeded
  • 5 Nadzor kakovosti
  • 6 Omejitve
  • 7 Reference

Fundacija

Peptoni v bujonu služijo kot hranila za pravilen razvoj mikroorganizmov. Salmonelini sevi uporabljajo peptone kot vir dušika, vitaminov in aminokislin.

Laktoza je fermentirajoči ogljikov hidrat, medtem ko je natrijev selenit inhibitorna snov, ki upočasni rast gram pozitivnih bakterij in večino bakterij, prisotnih v črevesni flori, zlasti v družini Enterobacteriaceae. Natrijev fosfat je pufer, ki stabilizira pH medija.

V primeru varianta juhe selenita, ki vsebuje L-cistin, je ta dodatna spojina redukcijsko sredstvo, ki minimizira toksičnost selenita, s čimer se poveča obnovitev salmonele..

Priprava

-Selenitejska juha

Če imate sestavine mešanice, lahko tehtate:

4 g brezvodnega natrijevega hidrogen selenita.

10 g brezvodnega natrijevega fosfata.

5 gr peptonas.

4 gr laktoze.

Spojine raztopimo v 1 litru sterilne destilirane vode. Lahko se rahlo segreje, da se raztopi v celoti.

Nekateri laboratoriji izpostavijo medij 10 minut v tekoči pari, da ga sterilizirajo, saj se avtoklav ne sme uporabljati. Če je medij steriliziran, ga lahko shranite v hladilnik, dokler ga ne uporabite.

Lahko se pripravi tudi brez sterilizacije in neposredno serviranje 10 do 15 ml v sterilne epruvete.

V tem primeru jo je treba pustiti počivati ​​in uporabiti takoj. Ker medij ni sterilen, ga ni mogoče shraniti v hladilniku za kasnejšo uporabo.

-Priprava komercialnega medija

Če je komercialni medij na voljo, stehtamo 23 g dehidriranega medija in raztopimo v enem litru sterilne destilirane vode. Na kratko segrejte, da končate raztapljanje. Ne sterilizirajte v avtoklavu. V sterilnih epruvetah aseptično postrežemo 10 ali 15 ml.

Končni pH medija mora biti 7,0 ± 0,2.

Opozoriti je treba, da je barva dehidriranega medija bež, pripravo pa je bistro in prosojno rumeno.

Variantna selenit-cistinska brozga

Vsebuje iste spojine iz juhe selenita, doda pa se 10 mg cistina. Preostanek postopka je popolnoma enak opisanemu postopku.

Uporabe

Ta medij je poseben za uporabo v epidemioloških študijah, kadar bolezen ni v njeni akutni fazi, asimptomatični bolniki ali zdravi nosilci..

Izolacija rodu Salmonella je ponavadi težavna, saj se običajno ugotovi, da vzorce onesnažuje na omejen način. Bivanje v majhnih količinah se zlahka prekriva z rastjo drugih bakterijskih rodov, ki se nahajajo v večji količini.

Po drugi strani je surovina, s katero se predelujejo predelana živila, pogosto izpostavljena toploti, procesom dehidracije, uporabi razkužil, sevanju in konzervansom, med drugim..

Zato se salmonele, ki so prisotne v surovini, zlorabljajo s predložitvijo proizvoda zgoraj omenjenim industrijskim postopkom. Prav tako so v primeru kliničnih vzorcev, kot so blato, lahko sevi šibki, če prihajajo od bolnikov, ki so bili zdravljeni z antibiotiki..

Zato je treba vsak vzorec, za katerega obstaja sum prisotnosti salmonele, predhodno obogatiti z laktozno juho in nato obogatiti s selenitno juho, da se optimizira njegovo izločanje v selektivnih medijih, kot so SS agar, ksilozni agar, lizinski deoksiholat (XLD). ), enterični Hektoen agar (HE) in zeleno-svetel agar, med drugim.

Poseljeno

Za vzorce blata vzemite 1 g vzorca in ga suspendirajte v epruveti z 10 do 15 ml juhe selenita. Če je blato tekoča, vzemite 1 ml in ga suspendirajte v juhi. Pri brisanju brisov iz rektalnih brisov izvlecite bris.

V vzorcih trdnih živil vzemite 1 gr in suspendirajte v bujonu selenita.

V tekočih živilih zmešajte v enakih delih z juho selenita pri dvojni koncentraciji.

Za centrifugiranje vzorcev urina, zavrzite supernatant, vzemite vso usedlino in jo suspendirajte v bujonu selenita..

Juhe inkubiramo pri 37 ° C 24 ur inkubacije. Bakterijsko rast dokazuje motnost. Dodatna cev na vzorec je lahko vključena tudi za inkubacijo pri 42 ° C. Nato sejate selektivne trdne medije iz selenitne juhe.

Nadzor kakovosti

Za nadzorovanje sterilnosti se selenitni bujon iz vsake serije brez inokulacije 24 ur inkubira pri 37 ° C. Pričakuje se, da ni motnosti ali spremembe barve medija.

Za nadzor dobrega delovanja medija se lahko uporabljajo znani sevi, kot so: \ t

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 in Proteus mirabilis ATCC 43071.

Pričakovani rezultati so:

  • Za prve tri vrste bakterij mora biti rast zadovoljiva.
  • Za Escherichia coli delno zaviranje.
  • Za Proteus zmerno rast.

Omejitve

Srednja selenitna juha je strupena za človeško kožo, zato se je treba izogibati neposrednemu stiku.

Reference

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Primerjava med gojiščem natrijevega selenita in tetrationata natrija, inkubiranega pri 37 ° C in 42 ° C izolacijo Salmonella blato za nosilce blata. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratoriji Britania. Selenito Caldo. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  3. Laboratoriji Neogen Selenitna juha Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto -Valela Z, Hernández-Aguirre E, Villarreal-Camacho J. Mikrobiološka izolacija Salmonella spp. in molekularna orodja za njegovo odkrivanje. Zdravje, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Na voljo na: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.