EC temelj za pripravo juhe, pripravo in uporabo



The EC brozga ali juha Escherichia coli Je selektivno tekoče gojišče. Ta medij je priporočen s standardnimi metodami za štetje celokupnih in fekalnih koliformnih bakterij s pomočjo tehnike najverjetnejšega števila (NMP) v vzorcih vode in hrane, kjer je glavni povzročitelj Escherichia coli.

Sredstvo EC je sestavljeno iz trinajta, laktoze, žolčnih soli, dikalijevega fosfata, monokalijevega fosfata, natrijevega klorida in vode. Njegova formula je strateško zasnovana tako, da spodbuja rast celokupnih in fekalnih koliformnih bakterij ter preprečuje razvoj drugih spremljajočih mikroorganizmov..

Bakterija Escherichia coli je glavni fekalni koliform, ki je prisoten kot onesnaževalec v vodi in virih hrane in povzroča pomembne gastrointestinalne prizadetosti.

Treba je opozoriti, da obstaja veliko serotipov Escherchia coli; med njimi lahko omenimo enterohemoragijo (EHEC), enteroinvazivno (EIEC), enteropatogeno (EPEC), enterotoksigensko (ETEC) in enteroaggregativno (EAEC) \ t.

To pomeni, da lahko omogoči razvoj vseh, vendar ne more razlikovati med njimi. V ta namen je treba izvesti dodatne preskuse.

Mikrobiološka študija vode in hrane z najverjetnejšim številom (NMP) za iskanje celokupnih in fekalnih koliformnih bakterij je protokol, ki je usklajen z več fazami; faza, faza potrditve in faza dokončanja. Sredica EC se uporablja v potrditveni fazi.

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 EC Broth
    • 1.2 EC brozga, modificirana z novobiocinom
  • 2 Priprava
    • 2.1 EC brozga
    • 2.2 EC brozga, modificirana z novobiocinom
  • 3 Uporabite
    • 3.1 Analiza celotnih in fekalnih koliformnih bakterij
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Priporočila
  • 6 Reference

Fundacija

EC broth

Sredstvo EC temelji na zagotavljanju potrebnih prehranskih elementov za optimalen razvoj celokupnih in fekalnih koliformnih bakterij, kjer je bakterija vključena Escherichia coli.

Te prehranske elemente zagotavlja triptein, ki je odličen vir peptidov in aminokislin. Poleg tega vsebuje tudi laktozo, fermentirajoči ogljikov hidrat, ki zagotavlja energijo in omogoča prikaz, ali bakterija proizvaja plin.

Po drugi strani pa medij vsebuje žolčne soli, ki zagotavljajo selektivni značaj, saj zavira rast Gram-pozitivnih mikroorganizmov, ki so lahko prisotni v vzorcu..

Prav tako sta dikalijev fosfat in monokalijev fosfat sistem za uravnavanje pH vrednosti. Ta sistem je potreben, ker laktoza, ki jo vsebuje juha, nagiba k nakisanju medija, ko ga fermentirajo mikroorganizmi, vendar se to kompenzira s fosfatnimi solmi..

Zato so ti elementi bistveni, saj lahko nenadzorovana kislost vpliva na pravilen razvoj iskanih mikroorganizmov.

Natrijev klorid stabilizira medij osmotsko, voda pa je topilo prisotnih raztopin in zagotavlja tekočo konsistenco mediju..

EC brona, modificirana z novobiocinom

Okrend in Rose sta ustvarila vrsto ES brozge, imenovano EC broth, modificirana z novobiocinom. Modifikacija je vključevala zmanjšanje koncentracije žolčnih soli in dodajanje 20 mg / dl novobiocina.

Ta sprememba daje prednost obnovitvi sevov. \ T Escherichia coli enterohemoragična (O157: H7).

Ta bakterijski serotip povzroča hud hemoragični kolitis, ki lahko povzroči hemolitični uremični sindrom (HUS); ki lahko povzročijo akutno odpoved ledvic, z visoko stopnjo umrljivosti, ki lahko doseže do 50% pri starejših.

Zaradi obolevnosti in umrljivosti, ki jo letno povzroča ta bakterija zaradi porabe kontaminirane hrane, Ministrstvo za kmetijstvo Združenih držav (USDA) široko priporoča uporabo tega sredstva..

Priprava

EC broth

Natehtamo 37,4 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Mešanico pustite počivati ​​5 minut. Nato se v viru toplote raztopi pogosto.

Ko se raztopi, se porazdeli v epruvete, ki so bile predhodno kondicionirane z Durhamsko cevjo. Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

PH medija mora biti 6,9 ± 0,2. Barva dehidriranega medija je bež in pripravljena je svetlo rumena.

Vina se hranijo v hladilniku, dokler se ne uporabijo. V času uporabe morajo biti juhe na sobni temperaturi.

Po drugi strani pa se lahko EC pripravi tudi v dvojni koncentraciji.

EC brona, modificirana z novobiocinom

Natehtamo 36,7 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru vode. Preostanek pripravka je enak zgoraj opisanemu.

Uporabite

Analiza celotnih in fekalnih koliformnih bakterij

EC brozga je idealna za potrditveno fazo študije koliformnih bakterij po metodi NMP, tako v vzorcih vode kot v farmacevtskih izdelkih in hrani..

Mlečne in mahnilne bujice, pridobljene v domnevni fazi, je treba ponovno posaditi v 2% svetlo zeleni žolč in v juho EC.

Za celostne koliformne bakterije se juhe inkubirajo v aerobiozi 24 do 48 ur pri 37 ° C, pri fekalnih koliformnih bakterijah pa se inkubirajo v aerobiozi 24 do 48 ur pri 44 ° C..

V obeh primerih se razlaga na naslednji način: mutne cevi s proizvodnjo plina se štejejo za pozitivne. Če v 24 urah ni pridobivanja plina, se inkubacija nadaljuje do 48 ur.

EC pozitivni bujoni preidejo v popolno potrditveno fazo, ki je sestavljena iz ponovnega sejanja v selektivnih medijih, kot so Mac Conkey agar, EMB agar ali Endo agar..

Če je uporabljena juha modificirana z novobiocinom, je priporočljivo, da se pozitivne epruvete ponovno posušijo na Mac Conkey agarju s sorbitolom..

Nadzor kakovosti

Kontrola kakovosti mora biti izvedena na vsaki seriji pripravljenega medija. Najprej je treba oceniti sterilnost medija. V tem smislu se eno ali dve juhi inkubirata brez inokulacije v aerobiozi 24 ur pri 37 ° C. Pričakovani rezultat je prozorna brozga, brez motnosti ali spremembe barve.

Drugič, treba je oceniti rast znanih sevov, za katere se lahko uporabijo naslednje bakterije: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

V vseh primerih je pričakovati zadovoljiv razvoj mikroorganizmov, pri čemer opazujemo moten bujon s proizvodnjo plina E. coli in brez plina za salmonelo.

Drugi sevi, ki se lahko vključijo v nadzor, so: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ti sevi morajo biti popolnoma zavrti.

Priporočila

-Namestitev cevi Durham je bistvena za preučevanje koliformnih bakterij.

-Sredstvo porazdelite v epruvete pred sterilizacijo, nikoli kasneje.

-Ne uporabljajte, če ima medij več kot 3 mesece priprave.

-Ne uporabljajte, če pride do kakršne koli spremembe običajnih lastnosti medija.

Reference

  1. Laboratoriji Britania. ES Srednje. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  2. E. coli enterohemoragične. Center za varnost preskrbe s hrano in javno zdravje. 2010. Na voljo na: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Srednje ES. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  4. Neogen Medij EC modificiran z novobiocinom. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Odkrivanje, izolacija in karakterizacija Escherichia coli proizvajalec toksinov Shiga iz svežega mletega govejega mesa iz mesnic v Concepción, provinca Tucumán. Rev Microgol z Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Na voljo na: www.scielo.org.