Osnova laktozadne juhe, pripravek in uporaba



The juha iz laktoze je tekoče, neselektivno gojišče, ki se uporablja predvsem kot sredstvo za predobogatitev pri izolaciji sevov salmonele iz mikrobiološke analize, opravljene na predelanih živilih, mlečnih proizvodih ali vodi. To priporoča Mednarodna komisija za mikrobiološke specifikacije za živila (ICMPF)..

Medij vsebuje encimsko razgradnjo želatine, mesnega ekstrakta in laktoze, snovi, potrebne za rast bakterij. Poleg tega je laktoza ogljikov hidrat, ki ga je mogoče fermentirati, zato se ga nekateri koliformi lahko razdelijo s proizvodnjo plina.

Iz tega razloga ameriško združenje za javno zdravje (APHA) priporoča bujonko za laktozo za domnevno študijo celokupnih in fekalnih koliformnih bakterij, ki jo kvalificirajo kot odlično alternativo za zamenjavo lauril sulfatne triptozne juhe v standardno tehniko najbolj verjetne številke (NMP). ), ki se uporablja za mikrobiološko analizo vzorcev živil, mleka in površinskih voda, podzemnih, rekreacijskih, gospodinjskih in industrijskih odpadkov.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
  • 3 Uporabe
    • 3.1 Predobogatitev
    • 3.2 Analiza celotnih in fekalnih koliformnih bakterij
  • 4 Nadzor kakovosti medija
  • 5 Reference

Fundacija

Za mikrobiološko analizo nekaterih vzorcev je korak predhodne obogatitve bistvenega pomena za pridobitev določenega mikroorganizma, ki je lahko v zelo nizki količini ali v neugodnih pogojih, ki kršijo ali zmanjšujejo njegovo sposobnost preživetja..

Tak je primer suhih in predelanih živil, ki so morda kontaminirana Salmonellas sp. V teh primerih, če so bakterije prisotne, so med proizvodnim procesom proizvoda trpele fizično in kemično zlorabo..

Na tak način, da so mikroorganizmi izpostavljeni neugodnim dejavnikom, kot so dehidracija, izpostavljenost inhibitornim ali toksičnim proizvodom, in prekrivanje, ki ga povzroči prisotnost drugih bakterij v večji količini..

V tem smislu ima laktozna brozga popravljalni učinek na poškodovane strukture mikroorganizma, zaradi česar se opomore in razmnožuje na tak način, da ga je mogoče odkriti..

Prav tako lahko laktozna brozga razredči inhibitorne snovi, ki lahko vplivajo na njeno sposobnost preživetja, kar omogoča njegov razvoj. Poleg tega je prehranska sestava bujona laktoze strateška za spodbujanje rasti Salmonella sp nad drugimi mikroorganizmi.

Za končno identifikacijo je treba gojiti na druge načine z dokončnimi pridelki.

Po drugi strani pa sestava medija omogoča tudi odkrivanje mikroorganizmov, ki fermentirajo laktozo, ki proizvajajo plin.

Priprava

Za pripravo enega litra juhe iz laktoze, stehtajte 13 gramov dehidriranega medija in raztopite v 1000 ml destilirane vode..

Da bi pomagali raztopiti medij v vodi, lahko raztopino malo segrejete, vendar ne preveč..

Ko je raztopina homogena, se pripravi takole: če se juha uporabi za iskanje koliformnih bakterij, se pripravi stojalo s epruvetami in vstavi Durmajeva fermentacijska cev na glavo..

Durhamova cev je zelo pomembna podrobnost, saj bo omogočila odkrivanje nastajanja plina, dragocene podatke pri iskanju koliformnih bakterij..

Ko so cevi pripravljene, se v njih razlije 10 ml bujona laktoze, ki mora biti dovolj, da pokrije celotno Durhamsko cev..

Če se bo juha iz laktoze uporabljala kot pred-obogatitvena brozga, ni treba postaviti Durhamove fermentacijske cevi. V tem primeru je potrebna večja količina medija (225 ml), ki se postreže v 500 ml steklenicah, široka usta in s termo odpornim navojnim pokrovčkom..

Nato se epruvete ali bučke 15 minut pripeljejo v avtoklav pri 121 ° C.

Medij naj ostane pri končnem pH 6,9 ± 0,2 pri 25 ° C.

Vina se hranijo v hladilniku, dokler se ne uporabijo.

Pred uporabo morajo biti juhe kaljene pri sobni temperaturi.

Po drugi strani pa lahko tudi laktozno juho pripravimo v dvojni koncentraciji.

Nekateri laboratoriji dodajo bromokrezolno vijolično bujon v laktozo kot indikator pH, da pokažejo cevi, kjer je bila sprememba barve pri fermentaciji laktoze. V tem primeru ima juha vijolično barvo in če fermentacija postane rumena.

Uporabe

V mikrobioloških laboratorijih se laktozni bujon pogosto uporablja kot relativno poceni medij, ki zagotavlja zanesljive in hitre rezultate (24-48 ur).

Uporablja se lahko za analizo celotnih in fekalnih koliformnih bakterij v vodi in hrani ali kot predhodno obogatitveno brozgo za salmonelo..

Pred-obogatitev

Predobogatitev je korak pred obogatitvijo vzorca, kar močno izboljša obnovo bakterij iz rodu Salmonella v predelanih živilih..

V ta namen vzorec trdne hrane (25 gramov) ali tekočine (25 ml) zasejemo v 225 ml bujona laktoze in inkubiramo 24 do 48 ur. Nato bo selenitna cistinska brozga ali tetrationatna brozga subkultivirana v obogatenem mediju. Nato preide na selektivne medije XLD in SS.

Analiza celotnih in fekalnih koliformnih bakterij

To je odlično sredstvo kot indikator fekalne kontaminacije.

Zato je laktozna brozga idealna za domnevno fazo koliformne študije po metodi najverjetnejše številke..

Za vzorce, pri katerih obstaja sum večje količine koliformnih bakterij, bo nacepljena manjša količina koliformnih bakterij (1 ml), pri vzorcih, pri katerih obstaja sum manjše količine koliformnih bakterij, pa se vnese več volumna vzorcev (10 ml)..

Za analizo smo naredili 10 razredčitev-1, 10-2, 10-3, za vsako uporabljeno koncentracijo tvorijo baterijo s 3-5 cevi.

Iz vsake razredčitve se v laktozno brozgo zaseje enak volumen.

Epruvete inkubiramo 24 ur. Sredstva, ki so negativna, inkubiramo še 24 ur.

Razlaga rezultatov je narejena z opazovanjem dveh značilnosti: prva je prisotnost ali odsotnost motnosti in ker ta medij ne vsebuje indikatorja pH, ne bo spremembe barve.

Drugi je proizvodnja plina ali ne. Plin se zlahka prikaže v Durhamovi cevi, tako da se v njem pojavi eden ali več mehurčkov zraka.

Šteje se, da je pozitiven, če se upoštevata obe značilnosti, tj. Motnost pri proizvodnji plina. Pozitivne epruvete je treba ponovno nasaditi v potrditvenem mediju (juha Brilliant Green 2% žolča in ES brozga)..

Kontrola kakovosti medija

- Pri pripravi medija je pomembno, da ne pozabite postaviti Durhams cevi, če je namen iste študije koliformnih bakterij..

- Medijev pred sterilizacijo ne pregrevajte.

- Porazdelite v epruvete pred sterilizacijo, nikoli kasneje.

- Ne uporabljajte, če ima medij več kot 3 mesece priprave.

- Ne uporabljajte, če opazite kakršne koli spremembe običajnih lastnosti medija.

- Ko pripravljate serijo bujona laktoze, preizkusite njegovo kakovost s semenom za sajenje, ki je znan kot Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii in Klebsiella pneumoniae. Dobro rastejo s proizvodnjo plina (pozitivna kontrola).

- Vključuje lahko tudi Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, ki rastejo dobro, vendar brez proizvodnje plina (negativna kontrola).

- Treba je opozoriti, da je prvotna barva dehidriranega medija bež in da je medij pripravljen zelo prozoren in prozorno rumen. Če pride do spremembe barve ali videza, lahko pride do poslabšanja kakovosti.

Reference

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologija in okoljska mikrobiologija. (2013) 1. izdaja. Univerza v Cartagenasu, Kolumbija.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B in Velázquez O. (2009). Tehnike za mikrobiološko analizo hrane. 2nd ed. Fakulteta za kemijo, UNAM. Mehika.
  3. Laboratoriji Conda Pronadisa. 2017. Dvojna koncentracija laktozne juhe (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Primerjava tehnik za ekstrakcijo koliformnih bakterij iz jezerskega sedimenta Xochimilco, Mehika. Rev. argent. mikrobiol.  2013; 45 (3): 180-184. Na voljo na: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Določanje mikrobiološke kakovosti arterskih vodnjakov okrožij osrednje, Cordillerne in Kapitalske občine. Mem. Inst. Investig. Cienc. Zdravje 2013; 11 (1): 5-14. Na voljo pri: scielo.iics.