Vogel-Johnson Agar temelj, priprava in uporaba



The Vogel-Johnsonov agar je trden, selektiven in diferencialen medij kulture, posebej formuliran za izolacijo Staphylococcus aureus. Ta medij so leta 1960 izdelali Vogel in Johnson iz modifikacije glicinskega teluritnega agarja, ki so ga leta 1955 oblikovali Zebovitz, Evans in Niven.

Modifikacija je vključevala povečanje koncentracije manitola v mediju in vključitev indikatorja pH. Trenutna formula je sestavljena iz tripteina, kvasnega ekstrakta, manitola, dikalijevega fosfata, litijevega klorida, glicina, fenol rdečega, agarja, 1% raztopine kalijevega telurita in vode..

Treba je opozoriti, da obstajajo še druga sredstva, ki so, tako kot Vogel-Johnsonov agar, selektivna za izolacijo S. aureus, kot soljen manitol agar in Baird Parker agar. V tem smislu bi lahko rekli, da je temelj Vogel-Johnsonovega agarja mešanica med slanim manitolnim agarjem in Baird Parkerjevim agarjem..

V prvih kolonijah S. aureus Odlikujejo jih fermentiranje manitola in pretvorba indikatorja pH v rumeno. Po drugi strani pa v drugem S. aureus karakterizira ga zmanjšanje telurita v telur in oblikovanje sivih do črnih kolonij. Obe lastnosti opazimo v Vogel-Johnsonovem agarju.

Ta medij, tako kot njegovi sorodniki, je uporaben za odkrivanje Staphylococcus aureus v vzorcih hrane, sanitarnem nadzoru industrijskih izdelkov in v kliničnih vzorcih.

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Prispevek hranil
    • 1.2 Izbirna moč
    • 1.3 Diferenčna moč
    • 1.4 Osmotsko ravnotežje in sredstvo za strjevanje
  • 2 Priprava
    • 2.1 1% m / v raztopina kalijevega telurita
    • 2.2 Vogel-Johnsonov osnovni medij agarja
  • 3 Uporabite
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Reference

Fundacija

Prispevek hranil

Vogel-Johnsonov medij vsebuje izloček in kvasni ekstrakt; obe snovi zagotavljata aminokisline z dolgo verigo, ki služijo kot vira ogljika in dušika, potrebne za rast bakterij. Bakterije, ki lahko rastejo v tem mediju, bodo hranila iz teh snovi.

Izbirna moč

Vogel-Johnsonov agar lahko zavira rast Gram-negativnih bakterij in celo nekaj Gram-pozitivnih bakterij, kar spodbuja razvoj koagulaza-pozitivnih stafilokokov. Zaviralne snovi so kalijev telurit, litijev klorid in glicin.

Različna moč

Snovi, ki tvorijo ta diferencialni medij, so manitol in kalijev telurit. Manitol je ogljikov hidrat, in ko je fermentiran, nastajajo kisline, ki spreminjajo medij iz rdeče v rumeno, kar se zgodi zaradi prisotnosti fenol rdečega indikatorja pH..

Medtem ko je brezbarvni telurit, ko je reduciran na kovinski, prosti telurid, prevzame temno sivo do črno barvo.

The Staphylococcus aureus fermentira manitol in zmanjšuje telurit v telur. Zato so tipične kolonije S. aureus v tem mediju so sivo ali črno obdani z rumenim medijem.

Bakterije, ki rastejo v tem mediju in ne zmanjšajo telurita ali fermentnega manitola, bodo zaradi alkalizacije medija z uporabo peptonov tvorile prozorne kolonije, obdane z rdečim medijem, še intenzivnejše od prvotne barve..

Po drugi strani bakterije, ki zmanjšujejo telurit, vendar ne fermentirajo manitola, bodo rasle kot sive ali črne kolonije, obdane z globoko rdečo barvo..

Če je bil medij pripravljen brez dodatka kalijevega telurita, so kolonije iz S. aureus razvili bi se kot rumene kolonije, obdani z rumenim medijem, kot na primer v slanem manitolnem agarju.

Osmotsko ravnotežje in sredstvo za strjevanje

Dikalijev fosfat ohranja osmotsko ravnovesje medija in uravnava pH na nevtralnost. 7.2. Medtem ko agar daje gojišču trdno konsistenco.

Priprava

1% raztopina kalijevega telurita v / v

Ta raztopina ni vključena v dehidrirano gojišče, ker se ne more sterilizirati v avtoklavu. Zato se pripravi ločeno in doda steriliziranemu mediju.

Nekatere komercialne hiše prodajajo pripravljeno za uporabo 1% raztopino kalijevega telurita. Če se želite pripraviti v laboratoriju, storite naslednje:

Stehtamo 1,0 g kalijevega telurita in izmerimo 100 ml destilirane vode. Telurit kalija raztopite v delu vode in nato dokončajte količino vode, dokler ne dosežete 100 ml. Raztopino sterilizirajte s filtracijo.

Vogel-Johnsonov osnovni medij agarja

Natehtamo 60 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Zmes segrejemo do vrelišča, da pomagamo pri popolnem raztapljanju. Med postopkom raztapljanja se medij pogosto premeša.

Sterilizirajte v avtoklavu s tlakom 15 funtov in 121 ° C za 15 minut. Odstranimo iz avtoklava in pustimo stati, dokler medij ne doseže temperature približno 45 do 50 ° C. Dodamo 20 ml predhodno pripravljene raztopine kalijevega telurita na 1%.

Zmešamo in vlijemo v sterilne petrijevke. Pustimo, da se strdi in naročimo obrnjene plakete za kasnejše shranjevanje v hladilniku do uporabe.

Končni pH pripravljenega medija mora biti 7,2 ± 0,2.

Preden zasadite vzorec, počakajte, da plošča prevzame temperaturo okolja.

Barva pripravljenega medija je rdeča.

Uporabite

Čeprav se lahko uporablja za izolacijo S. aureus v vseh vrstah vzorcev se uporablja predvsem za mikrobiološko analizo farmacevtskih izdelkov, kozmetike in hrane.

Priporočljivo je, da je inokulum gost. Sejanje se lahko izvede z obarjanjem z platinsko ročico ali površinsko z Drigalsko lopatico.

Plošče se inkubirajo pri 35-37 ° C 24 do 48 ur pri aerobiozi.

Nadzor kakovosti

Za kontrolo kakovosti Vogel-Johnsonovega medija se lahko uporabijo naslednji kontrolni sevi: \ t

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ali Proteus mirabilis ATCC 43071.

Pričakovani rezultat je naslednji: za seve S. aureus Zadovoljiva rast s črnimi kolonijami obdana z rumenim medijem. Za S. epidermidis redna rast s prosojnimi ali črnimi kolonijami obdana z rdečim medijem.

Prav tako, za E. coli pričakuje se, da bo prišlo do popolne inhibicije in za Proteus mirabilis delna ali popolna inhibicija; če raste, bo to zmerno in kolonije bodo črne, obdane z srednje rdečo barvo.

Reference

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel in Johnson Agar). 2006. Na voljo na: bd.com
  2. Laboratoriji Britania. Vogel-Johnsonov agar. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  3. Laboratoriji Britania. Kalijev telurit. 2015. Na voljo na: britania.com
  4. Laboratorij Himedia. Vogel-Johnsonov agar Sredina. 2018. Na voljo na: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel-Johnsonova agarska baza. Priročnik za mikrobiologijo Merck. 12. izdaja, str. 502-503. Na voljo v: Uporabniki / Ekipa / Prenosi
  6. Sodelavci Wikipédie, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipedija do enciklopedičnega življenja,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Venezuelski standard Covenin 1292-89. (1989). Hrana Izolacija in štetje Staphylococcus aureus. Na voljo v:sencamer.gob.ve