Svetlo zelen agar temelj, priprava in uporaba



The svetlo zelen agar je trden gojišče kulture, z visoko stopnjo selektivnosti. Uporablja se izključno za izolacijo sevov iz rodu Salmonella, vendar obstajajo nekatere izjeme, kot so vrste typhi in paratyphi, ki ne rastejo v tem mediju..

Iskanje rodov Salmonella je pogosto v vzorcih iztrebkov, vode ali hrane. V tem smislu je lahko ta medij zelo koristen. Ta agar so leta 1925 ustvarili Kristensen, Lester in Jurgens, ki ga je kasneje spremenil Kauffmann.

Sestavljen je iz pluripeptonas iz peptične prebave živalskega tkiva in pankreatične prebave kazeina, vsebuje tudi izvleček kvasa, natrijev klorid, laktozo, saharozo, fenol rdečo, svetlo zeleno in agar-agar..

Zanj je značilno, da je zelo negostoljuben medij za večino bakterij, ki spodbujajo rast salmonele, vendar pa nekateri koliformi lahko v njej obstajajo, se razvijajo šibko.

Pomembno je poudariti, da v tem mediju rod rodu Shigella ne raste in ne Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Če želimo izolirati te mikroorganizme, moramo uporabiti druga sredstva, kot je npr. XLD agar..

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Svetlo zelen agar
    • 1.2 Variante svetlo zelenega agarja (BGA)
  • 2 Priprava
  • 3 Uporaba / aplikacije
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Reference

Fundacija

Svetlo zelen agar

Vsaka od komponent, ki tvorijo medij, ima posebno funkcijo, ki določa lastnosti in lastnosti agarja.

Pluripeptonas in ekstrakt kvasa sta vir hranil, od koder mikroorganizmi vzamejo dušik in minerale, potrebne za njihov razvoj. Laktoza in saharoza sta vir energije za mikroorganizme, ki jih lahko fermentirajo.

Svetlo zelena je inhibicijska snov, ki preprečuje razvoj Gram-pozitivnih bakterij in veliko število gram-negativnih mikroorganizmov..

Natrijev klorid zagotavlja medij osmotske stabilnosti. Medtem ko je fenol rdeč indikator pH, postane barva pri odkrivanju proizvodnje kislin iz fermentacije ogljikovih hidratov.

Nefermentirajoče kolonije laktoze in saharoze rastejo v tem mediju bele barve, rožnate ali prozorne, na rdeči podlagi. Na primer bakterije iz rodu Salmonella.

Medtem ko bakterije, ki fermentirajo laktozo ali saharoza, lahko rastejo v tem mediju, se na rumeno zelenem ozadju razvijejo zelenkasto rumene ali zelenkasto rumene kolonije. Na primer, Escherichia coli in Klebsiella pneumoniae.

Variante svetlo zelenega agarja (BGA)

Obstajajo tudi druge variante svetlo zelenega agarja; novobiocin zelena agar svetla glukoza (NBG) in novobiocin agar svetlo zelen glicerol laktoza (NBGL).

Novobiocin agar svetlo zelena glukoza (NBG)

Vsebuje sojin agar triptikaze, železov amonijev citrat, natrijev tiosulfat pentahidrat, fenol rdeč, glukozo, svetlo zeleno, novobiocin in destilirano vodo.

Služi za izolacijo kolonij salmonele iz vzorcev blata.

V tem primeru sta svetlo zelena in novobiocin zaviralne snovi, ki preprečujejo rast gram pozitivnih bakterij in nekaterih gram negativnih mikroorganizmov..

Natrijev tiosulfat je vir žvepla, železov citrat pa je vir železa, ki je potreben za odkrivanje proizvodnje vodikovega sulfida z nastankom črnega oborine železovega sulfida..

Glukoza je fermentni ogljikov hidrat, fenol rdeča pa je indikator pH.

V tem mediju se kolonije salmonele razvijajo velike s črnim središčem, obkroženim z rdečkastim halojem, ki mu sledi jasno vidno območje. Nekateri sevi. \ T Citrobacter freundii proizvajajo kolonije, ki so identične salmoneli.

Svetlo zelena glivorocin laktoza iz agarja (NBGL)

Ta medij vsebuje triptikazni sojin agar, železov amonijev citrat, natrijev tiosulfat, laktozo, glicerol, svetlo zeleno, novobiocin in destilirano vodo..

Razlika tega medija s prejšnjim je ta, da se glukoza nadomesti z laktozo, glicerol in fenol rdeča pa se ne uporabljata..

Medij se uporablja tudi za izolacijo vrst Salmonella, kolonije se razvijejo s črno, s proizvodnjo vodikovega sulfida.

Samo kolonije, ki ne proizvajajo kisline iz glicerola ali laktoze, dosežejo proizvodnjo H2Dovolj je, ker nizki pH moti tvorbo H2To ima za posledico brezbarvne kolonije za večino vrst Proteus in Citrobacter.

Priprava

-Natehtamo 58 gramov komercialno pridobljenega dehidriranega medija. Dodajte ga v liter dvojno destilirane vode. Zmešamo, pustimo stati nekaj minut in pripravo predamo v vir toplote, dokler se ne raztopi popolnoma.

-Avtoklaviraj pri 121 ° C 15 minut, ne prekorači časa sterilizacije.

-Pustite stati in služite celo vroče v sterilnih petrijevih posodah. Končni pH mora biti 6,9 ± 0,2.

-Pustite, da se strdi in shranite v hladilniku do uporabe. Pred sajenjem morajo plošče imeti sobno temperaturo.

-Praškasti medij je zelen in pripravljen na oranžno-rjavo ali rdečkasto-zeleno barvo, odvisno od pH in komercialne hiše. Zelo rjava barva je pokazatelj pregretja agarja.

-Ko se agar strdi, ni priporočljivo preoblikovati, ker se medij poslabša.

Uporabe / aplikacije

Ta medij se med drugim uporablja za iskanje sevov iz rodu Salmonella iz vzorcev blata in mlečnih izdelkov..

Ker gre za precej negostoljubno okolje, je priporočljivo posaditi obilni inokulum, če se uporabi neposredni vzorec. V nasprotnem primeru je treba predhodno obogatitev in obogatitev vzorcev opraviti pred sajenjem v tem mediju.

Ker so nekateri sevi Salmonelle oteženi ali rastejo, je priporočljivo spremljati ta medij z drugimi selektivnimi agarji za salmonelo..

Za vse kolonije z značilno salmonelo je treba opraviti biokemične teste za dokončno identifikacijo.

Nadzor kakovosti

Za testiranje dobrega delovanja svetlo zelenega gojišča lahko uporabite seve ATCC za opazovanje razvoja istih na njem..

Najpogostejši sevi, ki se uporabljajo za nadzor kakovosti, so: \ t Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Prvi trije morajo dati rdeče ali prozorne bele kolonije na rdeči podlagi. Salmonella z dobrim razvojem in Proteus z redko ali redno rast.

Klebsiella in Escherichia so pričakovane rumenkasto rumene kolonije z rumenim ozadjem, v primeru Shigella in Staphylococcus pa je \ t.

Dehidrirano gojišče je treba hraniti pri sobni temperaturi, na suhem mestu, ker je medij zelo higroskopičen.

Reference

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Brilliant Green Agar. 2009
  2. Britanski laboratorij Svetlo zelen agar. 2015.
  3. Laboratorij BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik