Podlaga, priprava in uporaba TSI Agar TSI



The TSI agar ali železov trojni sladkorni agar je trden kulturni medij, ki služi kot biokemični test za usmerjanje začetne identifikacije gram negativnih bacilov. Temelji na dokazovanju fermentacije prisotnih sladkorjev in proizvodnji vodikovega sulfida in plina.

Njegova sestava in podlaga sta zelo podobni Kliglerjevemu testu železa, z razliko, da le-ta vsebuje le glukozo in laktozo. Namesto tega, kot že ime pove, triple železo vsebuje tri fermentirajoče ogljikove hidrate: glukozo, laktozo in saharozo..

Poleg tega ima TSI medij štiri derivate beljakovin, zaradi katerih je zelo hranljiv agar: ekstrakt kvasa, mesni ekstrakt, pepton in proteozni pepton. Vsebuje tudi železov amonijev sulfat, natrijev tiosulfat, natrijev klorid, fenol rdeč in agar.

Nezmožnost mikroorganizma, da fermentira prisotno glukozo v mediju, ga takoj izključi iz družine Enterobacteriaceae. Zato je ta preskus bistvenega pomena za odločitev, katero pot za identifikacijo je treba sprejeti za določitev rodu in vrste.

Vsak laboratorij se odloči, ali deluje s TSI agar ali Kligler agar agar.

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Natrijev klorid in agar
    • 1.2 Indikator pH (fenol rdeče)
    • 1.3 Proteinski derivati ​​(ekstrakt kvasa, mesni ekstrakt, pepton in proteozni pepton)
    • 1.4 Fermentacija ogljikovih hidratov (glukoze, laktoze in saharoze) \ t
    • 1.5 Proizvodnja plina
    • 1.6 Natrijev tiosulfat in železov amonijev sulfat (proizvodnja vodikovega sulfida) \ t
  • 2 Priprava
  • 3 Uporabe
  • 4 Seeded
  • 5 Omejitve
  • 6 Reference

Fundacija

Vsaka od spojin ima funkcijo znotraj medija.

Natrijev klorid in agar

Natrijev klorid je potreben za vzdrževanje osmotskega ravnovesja medija. Medtem ko agar daje trdno konsistenco.

Indikator PH (fenol rdeče)

PH pripravljenega medija je uravnotežen na 7,3, kazalnik pH (fenol rdeč) pa postane rumeni pod 6,8. To pomeni, da bodo majhne količine kisline, ki nastanejo pri fermentaciji sladkorjev, spremenile medij iz rdeče-oranžne v rumeno.

Če se fermentacija ne pojavi, se bo z uporabo peptonov alkaliziralo gojišče, od rdeče-oranžne do močno rdeče..

Derivati ​​beljakovin (izvleček kvasa, mesni ekstrakt, pepton in proteozni pepton)

Ko bakterije presnavljajo beljakovine, prisotne v TSI agarju, se proizvajajo amini, ki alkalizirajo medij (predvsem na ravni stožca), ker reakcija potrebuje kisik. Amini obračajo okvir v močno rdečo.

Toda to bo odvisno od sposobnosti bakterij za fermentacijo ogljikovih hidratov ali ne.

Fermentacija ogljikovih hidratov (glukoze, laktoze in saharoze)

Študija fermentacije sladkorjev lahko daje več slik in vsaka od njih je različno interpretirana. Razlaga testa deli mikroorganizme v tri kategorije: fermentorji brez glukoze, fermentorji brez laktoze in fermentorji laktoze / saharoze..

Opozoriti je treba, da je količina glukoze v mediju omejena, koncentracija laktoze in saharoze pa je 10-krat višja..

Bakterije iz družine Enterobacteriaceae in drugi mikroorganizmi, ki fermentirajo glukozo, bodo začeli fermentirati ta sladkor, ker je to najpreprostejši ogljikov hidrat za energijo..

Po drugi strani pa sta laktoza in saharoza kompleksni ogljikovi hidrati, ki jih je treba razgraditi in pretvoriti v glukozo, tako da lahko vstopijo v ciklus Embden-Meyerhof..

-Nefermentirajoči mikroorganizmi glukoze

Ko inokulirani mikroorganizem ne more fermentirati glukoze, lahko veliko manj fermentira druge ogljikove hidrate. Zato se tukaj ne tvorijo kisline, toda zaradi uporabe peptonov nastane amin v stožcu.

V tem primeru poševnica postane močnejša rdeča in dno cevke lahko ostane nespremenjeno ali pa se lahko alkalizira, tako da celotna rdeča cev.

Interpretacija: K / K pomeni alkalno ali alkalno ali nevtralno ozadje

Na sliki, ki je na začetku članka, si oglejte sliko cevi D.

Ta rezultat kaže, da mikroorganizem ne pripada družini Enterobacteriaceae.

-Ne-fermentirajoči mikroorganizmi laktoze / saharoze

Če bakterije lahko fermentirajo glukozo, ne pa laktozo ali saharozo, se bo zgodilo naslednje:

Bakterija bo porabila vso glukozo, ki je prisotna po približno 6 do 8 urah, tako da je lahko nakisala poševno in taco; to pomeni, da se bo agar popolnoma obarval. Ko se glukoza izčrpa in nezmožnost uporabe laktoze in saharoze, bakterije začnejo s presnovo beljakovin.

Ta reakcija potrebuje kisik, zato se degradacija peptonov pojavi na površini (stožčasti). Amini proizvajajo alkalizacijo plošče tako, da rumeno obarvajo v rdečo. Ta reakcija je dokazana pri 18 do 24 urah inkubacije.

Razlaga: K / A pomeni alkalni stožec in kislinski taco.

Na sliki, ki je na začetku članka, si oglejte sliko cevi B.

-Mikroorganizmi, ki fermentirajo laktozo / saharozo

Očitno lahko mikroorganizmi, ki lahko fermentirajo laktozo in saharozo, fermentirajo glukozo. Ko je izločena minimalna količina glukoze v mediju, se nastali piruvat začne presnavljati in tvoriti kisline skozi aerobni cikel Krebsa, v obdobju 8 do 12 ur pa bo celoten medij rumeno.

Če je bakterija sposobna cepitve laktoze ali saharoze, se bodo kisline še naprej proizvajale, po 18 do 24 urah pa bo celotna cev - kljun in taco - ostala rumena..

Treba je opozoriti, da je uporaba glukoze na dva načina: ena v aerobni obliki v poševnem delu cevi, druga pa v anaerobni obliki na dnu epruvete..

Interpretacija: A / A pomeni kislinsko steno / dno kisline. Lahko predstavlja plin ali ne.

Na sliki, ki je na začetku članka, si oglejte sliko cevi A.

Proizvodnja plina

Nekateri mikroorganizmi lahko proizvajajo plin med fermentacijo sladkorjev. Plin se v cevi pokaže s tlakom, ki ga ima v notranjosti agarja. Tlak povzroča nastanek mehurčkov ali premik agarja. Včasih lahko tvorba plina razbije medij.

Pomembno je, da je v času setev vmesnika TSI predrtje čisto središče agarja, dokler ne doseže dna. Če je vbod preusmerjen proti stenam cevi, lahko povzroči lažne pozitivne rezultate pri proizvodnji plina, ker bo pobegnil skozi napačno oblikovan kanal.

Proizvodnja plina, kot tudi reakcije, ki se pojavijo v stožcu agarja, potrebujejo kisik, zato je priporočljivo, da je cev pokrita z bombažnim čepom, in če je uporabljen pokrov iz bakelita, ga ni treba popolnoma prilagoditi..

Proizvodnja plina je pozitivna (+) ali negativna (-).

Natrijev tiosulfat in železov amonijev sulfat (proizvodnja vodikovega sulfida)

Bakterije, ki lahko proizvajajo vodikov sulfid (brezbarvni plin), vzamejo v mediju žveplo natrijevega tiosulfata. Ko nastane H2S reagira s železovim amonijevim sulfatom in proizvaja železov sulfid (črna oborina je jasno vidna).

Proizvodnja H2S je naveden kot pozitiven (+) ali negativen (-).

Na sliki, ki je na začetku članka, si oglejte sliko cevi C.

Priprava

Natehtamo 62,5 g dehidriranega trsnega sladkorja (TSI) in raztopimo v enem litru destilirane vode.

Segrejemo, dokler se agar popolnoma ne raztopi. Kuhajte eno minuto in pogosto mešajte. Porazdelite 4 ml medija v 13/100 epruvete z bombažnim pokrovom.

Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut. Odstranite iz avtoklava in počakajte na nagnjen način. Pazite, da sta osnovna enota in okvir enako oddaljena.

Shranjujte v hladilniku 2-8 ° C. Pred zasejanjem bakterijskega seva pustite, da se strdi.

Barva dehidriranega medija je svetlo beige, pripravljeni medij pa rdeče-oranžni

Končni pH pripravljenega medija je 7,3 ± 0,2.

Uporabe

Test TSI se pogosto uporablja na ravni mikrobiološkega laboratorija. Ta preskus je bistvenega pomena za usmerjanje vrste preskusa, ki ga je treba uporabiti za ugotavljanje vrste in vrste. Njegova dobra izvedba in interpretacija lahko prihrani material in delo.

Če je rezultat TSI K / K in je test citokrom oksidaze pozitiven, je znano, da je treba teste uporabiti za identifikacijo ne fermentirajočih gram negativnih bacilov, kot so Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, med drugimi rodovi. Če je negativna oksidaza, je usmerjena proti rodovom Acinetobacter, Stenotrophomonas itd..

Po drugi strani, če dobimo TSI A / A ali K / A in je citokromoksidazni test negativen, več nitratov se reducira na nitrite, zato bomo imeli gotovost, da je to mikroorganizem iz družine Enterobacteriaceae. V tem primeru bo pot za identifikacijo usmerjena na specifične teste za to skupino bakterij.

Po drugi strani, če dobimo sliko K / A ali A / A in je test citokrom oksidaze pozitiven, bomo dodatne preskuse, ki jih je treba namestiti, usmeriti v identifikacijo fermentacijskih sevov, ki ne pripadajo družini Enterobacteriaceae, kot so: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio in Pasteurella.

TSI z vodikovim sulfidom, negativno oksidazo, bo usmerjal identifikacijo naslednjih rodov družine Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella ali Salmonella.

TSI z redkim ali zmernim vodikovim sulfidom v alkalni steni z alkalnim dnom in pozitivno oksidazo bo vodil uporabo testov za identifikacijo gram-negativnih, nefermentirajočih bacilov, ki proizvajajo H2S, kot npr Shewanella putrefaciens.

Nazadnje se lahko TSI uporabi za preiskavo proizvodnje vodikovega sulfida v gram-pozitivnih bacilih, zlasti kadar obstaja sum Erysipelothrix rhusiopathiae.

Poseljeno

Medij TSI je treba nacepiti s čistimi kolonijami, izoliranimi v primarnih ali selektivnih kulturah. Če je kolonija vzeta iz selektivnih medijev, ki so bili zasejani z vzorci z mešano floro, je treba paziti, da se vzame samo površina, ker v spodnjem delu kolonije lahko obstajajo sposobni sevi, ki so ovirani v tem mediju.

Zato se zanke nikoli ne ohladi v selektivnem mediju, da se nato vzame kolonija in inokulira medij TSI.

Zasaditev bo izvedena z ravno zanko ali iglo. Izdelali bomo punkcijo, pri tem pa pazili, da bo skozi središče sredine, dokler ne doseže dna, nato pa bo sajenje končano inokuliralo površino na cik-cak način. Ne delajte dveh punkcij.

Inkubiramo pri 37 ° C v aerobiozi 18-24 ur. Interpretirajte v tem času, niti pred niti po.

Omejitve

Preskus TSI je treba odčitati od 18 do 24 ur inkubacije. Branje pred tem časom lahko daje lažno pozitivno vrednost fermentacije A / A. Ker lahko branje po tem času povzroči lažno negativno podobo nefermentorja zaradi porabe peptonov, ki alkalizirajo medij..

Reference

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemični testi za identifikacijo klinično pomembnih bakterij. 3. izd. Uvodnik Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI agar." Wikipedija, Prosta enciklopedija. 10 Jul 2018, 08:09 UTC. 10. februar 2019, 03:33 Na voljo na: en.wikipedia.org
  5. Laboratoriji Britania. TSI Agar (trojni železov agar s sladkorjem). 2015. Na voljo na: britanialab.com
  6. BD Laboratories Agar s trojnim sladkorjem (TSI Agar). \ T 2003. Na voljo na: bd.com