Temelj, pripravek in uporaba Agar Thayer Martin



The Thayer Martin agar Je zelo hranljivo in selektivno trdno sredstvo za izolacijo Neisseria meningitidis in Neisseria gonorrhoeae; znan kot patogen ali klinično pomemben Neisseria.

Ena najpomembnejših posebnosti agarja Thayer Martin je visoka vsebnost prehranskih dopolnil. Ta lastnost je nepogrešljiva, ker so Neisserias zelo zahtevni mikroorganizmi s prehranskega vidika in zato ne rastejo v običajnih medijih..

Po drugi strani, ker se ti mikroorganizmi običajno nahajajo v nesterilnih območjih, je treba dodati inhibitorje, ki ovirajo rast spremljajoče flore, ne da bi to vplivalo na razvoj rodu Neisseria..

Ta agar je sestavljen iz GC baznega agarja, hemoglobina, dodatnih prehranskih dopolnil in kompleksa inhibitornih snovi (antibiotiki in antimikotiki). Komercialne hiše prodajajo posamezne dodatke posebej.

Vzorec, ki bo posajen v tem mediju, je odvisen od iskanega mikroorganizma. Za Neisseria gonorrhoeae Idealni vzorci so izločki vagine in sečnice. Medtem ko za Neisseria meningitidis najpogosteje uporabljeni vzorci so CSF, žreli in nazofaringealni eksudati.

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1,1 GC bazni agar
    • 1.2 Hemoglobin
    • 1.3 Dodatek za obogatitev
    • 1.4 Zaviralci
  • 2 Priprava
    • 2.1 Originalni Thayer Martin Agar
    • 2.2 Spremenjen Agar Thayer Martin
  • 3 Uporabite
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Omejitve
  • 6 Reference

Fundacija

Neisserias so mikroorganizmi, ki so razvrščeni kot nadležni, zato je njihova izolacija težka. Zato je Thayer Martín kompleksen medij in vsaka njegova komponenta izpolnjuje funkcijo, ki je pojasnjena spodaj:

GC jedro agar

GC agar vsebuje proteozni pepton, koruzni škrob, natrijev klorid, dikalijev fosfat, monokalijev fosfat in agar-agar. Njegove sestavine zagotavljajo osnovna hranila za razvoj mikrobov, nevtralizirajo strupene maščobne kisline, prispevajo k ohranjanju osmotskega ravnovesja, določajo pH in zagotavljajo trdno konsistenco okolja..

Hemoglobin

Hemoglobin zagotavlja faktorje V in X (nikotinamid adenin dinukleotid NAD in hemin). Zato v tem okolju rastejo tudi vrste Haemophilus. Hemoglobin se lahko komercialno dobi v dehidrirani obliki ali pa se lahko v medij doda sveža defibrinirana goveda..

Dodatek za obogatitev

Po drugi strani pa je treba obogatitveni dodatek dodati Thayer-Martinovemu mediju, ker hranila, ki jih vsebuje osnovni agar, ne zadoščajo za potrebe rodu Neisseria..

Najpogosteje uporabljen dodatek za obogatitev se imenuje isovitalex. Vsebuje glutamin, adenin, NAD, kokarboksilazo, gvanin, železov nitrat, p-amino benzojsko kislino, vitamin B12, tiamin in glukozo. Vse te spojine so potrebne za pravilen razvoj patogene Neisseria.

Zaviralci

Ker je zelo hranljiv medij, je treba uporabiti inhibitorje za preprečevanje rasti mikroorganizmov običajne flore območja in tako spodbujati izolacijo rodu Neisseria..

Kompleks inhibitorjev je sestavljen iz vankomicina, kolistina in nistatina. Vankomicin zavira rast Gram-pozitivnih bakterij, kolistin preprečuje razvoj Gram-negativnih bakterij, kot so Pseudomonas in nekatere saprofitske Neisseria, nistatin pa deluje na kvasovke kot Candida albicans.

Vendar je bil nato spremenjen Thayer Martin agar; spremembe so vključevale dodajanje trimetoprima, povečanje količine agarja in dodajanje dodatne glukoze. Te spremembe so bistveno izboljšale obnovitev vrst Neisseria gonorrhoeae.

Opozoriti je treba, da trimetoprim zavira rast rodu Proteus in posledično nastajanje rojev. V tem smislu so antibiotiki tisti, ki zagotavljajo selektivno naravo medij Thayer Martin.

Priprava

Originalni Thayer Martin Agar

-GC Agar

Odtehtamo 8,2 g dehidriranega GC medija in suspendiramo v 100 ml. Zmešamo in kuhamo 1 minuto s pogostim mešanjem, da se raztopi v celoti. Mešanico sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

-2% hemoglobina

2 g dehidriranega hemoglobina suspendiramo v 2 ali 3 ml vroče destilirane vode, da dobimo enakomerno zmes. Dodajte malo vode za dokončanje volumna 100 ml. Suspenzija mora biti pred sterilizacijo homogena.

Sterilizirajte v avtoklavu 15 minut.

-Dodatek za obogatitev

Komercialno cesto rekonstituirajte z razredčilom, ki ga zagotavlja ista gospodarska hiša. Dobro premešajte. Količina razredčila, ki se bo uporabila, bo določena v navodilih za komplet..

-Dodatek inhibicije V.C.N (vankomicin, kolistin, nistatin)

Vialo rekonstituirajte z vehiklom, ki ga zagotavlja gospodarska hiša. Dobro premešajte. Količina razredčila, ki se bo uporabila, bo določena v navodilih za komplet..

-Pripravljeno

Za vsakih 100 ml GC agarja nadaljujte na naslednji način:

Ko agar GC zapusti avtoklav, se ohladi na temperaturo približno 50 ° C in doda 2 ml pripravljene raztopine hemoglobina, 2 ml dodatka za obogatitev (isobitalex ali britalex) in 2 ml dodatka za inhibicijo. Zmešajte in postrezite v sterilnih petrijevih posodah.

Pustite, da se strdi in shranite v hladilniku do uporabe.

Barva pripravljenega medija je češnjevo rdeča. Končni pH medija je 7,2 ± 0,2

Spremenjeni agar Thayer Martin

Odtehtamo 8,2 g dehidriranega GC medija in suspendiramo v 100 ml. Dodamo 1 g agarja in dodamo 0,3 g glukoze. Zmešamo in kuhamo 1 minuto s pogostim mešanjem, da se raztopi v celoti. Mešanico sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Pripravite hemoglobin in dodatek za obogatitev, kot je opisano zgoraj.

Dodatek inhibicije je V.C.N.T (vankomicin, kolistin, nistatin, trimetoprim).

-Pripravljeno

Nadaljujte, kot je opisano za prvotni Thayer Martin agar.

Uporabite

Agar Thayer Martin je treba pred sejanjem vzorcev kaljeno. Najpogosteje uporabljeni vzorci so faringealni eksudati, nazalni eksudati, izločanje vagine, sečnice in / ali rektuma in CSF..

Uporabite sveže odvzete vzorce in na agarju naredite močno inokulacijo. Vzorci se sejejo neposredno z iztokom materiala, nato pa se razmaščijo na površini.

Plošče se inkubirajo pri 35-37 ° C 24 do 48 ur v mikroaerofilnem kozarcu (5% CO2). Ob koncu inkubacijske dobe se plošče pregledajo za majhne, ​​sive in včasih sluzasto podobne kolonije..

Opravite Gram in potrditvene biokemične teste za sumljive kolonije.

Nadzor kakovosti

Za izvajanje kontrole kakovosti agarja Thayer Martin se lahko uporabijo naslednji mikrobni sevi.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 in Neisseria meningitidis ATCC 13090; pri obeh sevih pričakujemo zadovoljiv razvoj.

Vključiti je treba tudi naslednje seve: \ t Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 in Candida albicans ATCC 10231. Pri vseh se pričakuje popolna ali delna inhibicija v tem mediju.

Omejitve

-Upoštevati je treba, da lahko bakterije, ki so odporne na uporabljene inhibitorje, rastejo v mediju..

-Obstajajo sevi Neisseria gonorrhoeae ki je lahko občutljiva na koncentracijo uporabljenega vankomicina. Zato je priporočljivo, da vzporedno uporabljate čokoladni agar, dopolnjen z izovitaleksom, vendar brez inhibitorjev.

-Obstajajo sevi kvasovk, odpornih na nistatin, ki lahko rastejo v tem gojišču in vplivajo na izolacijo patogenega Neisseria, zlasti gonokoka..

Reference

  1. Valtekovi diagnostični laboratoriji. Agar Thayer-Martin.2016. Na voljo v: com
  2. Laboratoriji Britania. Thayer Martin je spremenil medij. 2010. Na voljo na: britanialab.com
  3. Prispevki Wikipedije. Thayer-Martin agar. Wikipedija, svobodna enciklopedija. 26. oktober 2017, 16:33 UTC. Na voljo na: wikipedia.org4. Dostopno 28. februarja 2019.
  4. Laboratoriji Britania. GC agar. 2010. Na voljo na: britanialab.com.
  5. Laboratoriji BBL ™ Srednje obogatitev za zahtevne mikroorganizme. 1999. Na voljo na: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.