Agar TCBS podlage, priprave in uporaba



The TCBS agar je visoko selektivno in diferencialno trdno gojišče, ki se uporablja predvsem za izolacijo in kulturo Vibrio bakterij Vibrio cholerae, V. vulnificus in V. parahaemolyticus kot glavni patogeni tega rodu.

Kratica TCBS pomeni tiosulfat citratni žolčnik saharoza. Ta agar je znan tudi kot selektivni medij za Vibrios. Prvotno formulo je ustvaril Nakanishi in kasneje spremenil Kobayashi.

Sestavljen je iz izvlečka kvasa, mesnega peptona, triptina, natrijevega citrata, natrijevega tiosulfata, vola žolča, saharoze, natrijevega klorida, železovega citrata, bromotimola, timola in agarja..

Ta sestava omogoča ustrezen razvoj vrst Vibrio iz vode, iztrebkov in vzorcev hrane; razen za Vibrio hollisae, v tem mediju ne raste. Poleg tega je medij TCBS sposoben zavirati rast drugih spremljajočih bakterij, zlasti koliformnih bakterij.

Zaradi hudih gastrointestinalnih in izven črevesnih težav, ki jih povzročajo nekatere vrste rodov Vibrio, je njihova diagnoza zelo pomembna. Človek je okužen predvsem z uživanjem surove ali slabe morske hrane ali kontaminirane vode, pa tudi z okužbo ran.

Zaradi tega bi morali klinični laboratoriji vključevati agar TCBS v študijo kultur blata tekočih vzorcev blata, zlasti s pojavom riževe vode. Še posebej, če pacient poroča, da je bil v stiku z morsko vodo ali da je užival morske sadeže ali ribe.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
  • 3 Uporabite
  • 4 Seeded
  • 5 Omejitev
  • 6 Nadzor kakovosti
  • 7 Reference

Fundacija

Ekstrakt kvasovk, mesni peptoni in triptin so hranilni vir tega medija. Vendar pa je TCBS agar negostoljuben medij za večino bakterij.

Njegova visoka selektivnost je določena z dodatkom natrijevega citrata in volovega žolča; oba sta inhibitorna sredstva, ki zagotavljajo tudi alkalni pH medija, kar omejuje rast spremljajoče flore in daje prednost rasti V. cholerae, med drugimi vrstami. Treba je opozoriti, da Vibrio cholerae je zelo občutljiva na zgago.

Na drugi strani je natrijev klorid ravnotežje osmotsko na medij. Poleg tega, ker je njegova koncentracija visoka, deluje tudi kot zaviralno sredstvo, ki spodbuja rast halofilnih bakterij.

Saharoza je fermentabilni sladkor, ki skupaj z modrimi indikatorji pH bromotimola in timolove modre barve dajejo razlikovalni značaj mediju. Iz tega razloga s tem pomeni, da je mogoče razlikovati seroze, ki fermentirajo, iz nefermentirajočih sevov.

Kolonije fermentacijskih sevov saharoze razvijejo rumeno barvo in bodo zaradi proizvodnje kislin spremenile medij iz zelene v rumeno. Ne fermentorji rastejo prosojno in medij ostane prvotna barva (zelena)..

Prav tako ta medij vsebuje natrijev tiosulfat kot vir žvepla in železov citrat kot sredstvo za odkrivanje. Oba prikazujeta bakterije, ki lahko proizvajajo vodikov sulfid (brezbarvni plin). H2S nastane iz tiosulfata in kasneje z reagiranjem s železovim citratom nastane vidna črna oborina.

Končno, agar daje tisti trdni konsistenci mediju.

Priprava

Stehtamo 89 g dehidriranega medija in raztopimo v enem litru destilirane vode. Pomoč pri raztapljanju s segrevanjem in pogostim mešanjem. Zmes lahko kuhamo 2 minuti.

Ta medij ne avtoklavira. Po raztapljanju se namesti neposredno na sterilne plošče. Ko se strdi, so razporejene na obrnjeni način v izdelovalci plakov in shranjene v hladilniku (2–8 ° C), dokler se ne uporabijo.

Sredstvo po pripravi mora biti pri pH 8,6 ± 0,2.

Barva dehidriranega medija je svetlo bež ali zelenkasto-bež, barva medija pa je gozdno zelena ali modro zelena..

Pomembno je, da plošče pustimo pred sejanjem vzorcev.

Uporabite

Najpogostejši vzorec za izolacijo Vibriosa je driska.

Vzorce blata, če jih ni mogoče takoj zasaditi na selektivnem gojišču, je treba prevažati sredi Cary Blair.

Da bi povečali občutljivost kulture, lahko fekalije preidejo skozi peptonsko vodo pri pH 8,4 kot obogatitveno gojišče največ 8 ur, od tam pa se subkulturirajo v TCBS medij..

Upoštevati je treba tudi, da lahko nekateri sevi Vibriosa povzročijo septikemijo pri imunosupresiranih bolnikih, zato jih lahko izoliramo iz krvnih kultur. Prav tako lahko analiziramo vzorce vode in hrane iz morja, če pride do epidemičnih izbruhov bolezni koler.

Poseljeno

Inokulum vzorca, ki se preučuje, mora biti viden, sejanje poteka po metodi striating z izčrpanjem. Plošče inkubiramo 24 ur pri 37 ° C v aerobiozi.

Domnevne kolonije Vibrio cholerae So srednje velike, gladke, neprozorne, s tankimi robovi in ​​rumene barve, ker fermentirajo saharozo..

Na podoben način, vrste V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii in nekaj V. vulnificus. Druge vrste Vibrios klinično pomembne kot V. parahaemolyticus ne fermentirajte saharoze, razvijajo se kot olivno zelene kolonije.

Po drugi strani pa ne smemo pozabiti, da lahko nekateri sevi Aeromonas in Plesiomonas, ki so oksidaza (+), rastejo v tem mediju, razvijajo rumene kolonije, ki lahko zmedejo zdravnika. Medtem ko nekateri sevi Pseudomonas tudi oksidaze (+) rastejo kot zelene kolonije kot tudi V. parahaemolyticus.

Omejitev

Test oksidaze, ki je pozitiven za rod Vibrio, se nikoli ne sme izvajati iz kolonij, pridobljenih iz agarja TCBS, saj bo dobljeni rezultat lažno negativen. Spojine v mediju močno vplivajo na ta test. Zato je treba to narediti iz subkultur na krvnem agarju.

Nadzor kakovosti

Da bi dokazali, da je medij v dobrem stanju, je priporočljivo, da posadite znane ali certificirane kontrolne seve in opazujete, če rast ustreza pričakovanim značilnostim..

V ta namen so:

-Vibrio cholerae - Zadovoljiva rast (rumene kolonije, prosojna meja).

-Vibrio parahaemolyticus - Zadovoljiva rast (kolonija z zelenim centrom in prosojna meja).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - zadovoljiva rast (rumene kolonije z oreoli iste barve okoli kolonije).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - popolna ali delna inhibicija (majhne rumene ali prosojne kolonije).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - delna ali popolna inhibicija (modre kolonije).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Popolnoma zavrto.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Popolna ali delna inhibicija. (Majhne kolonije središče zeleno prosojno rob).

Inkubacija neinokuliranega medija ne sme imeti sprememb.

Reference

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratoriji. TCBS agar. 2009. Na voljo na: f-soria.es
  2. Laboratorij BD. BD. TCBS Agar 2003. Na voljo na: bd.com
  3. Laboratoriji Britania. TCBS Medium. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS Agar. 2016. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.