Soja agar tripticaseína temelj, priprave in uporabe



The triptikasein sojin agar ali triptikaza sojin agar je trdna, neselektivna in hranljiva gojišča. Označena je s črkami TSA za akronim v angleškem Trypticase Soy Agar. Sestavljen je iz tripteina, sojinega peptona, natrijevega klorida in agar-agarja.

Zaradi visoke hranilne moči je idealna za gojenje zmerno zahtevnih in nezahtevnih mikroorganizmov. Medij brez dodatnih dodatkov ni priporočljiv za primarne kulture, vendar je zelo uporaben za subkulturacijo čistih sevov in ohranjanje njihove sposobnosti preživetja..

Tudi ta agar služi kot osnova za pripravo obogatenih medijev, kot je krvni agar, še posebej, če je potrebno opazovati vzorce hemolize in namestiti taksone optokvina in bacitracina, ki so potrebni za diagnozo. Streptococcus pneumoniae in Streptococcus pyogenes v tem zaporedju.

Po drugi strani pa je v kombinaciji z antibiotiki koristno izolirati fakultativne in stroge anaerobne mikroorganizme, ki so klinično pomembni, iz vzorcev z mešano floro..

Končno sestava sojinega agarja tripticasein in njegova učinkovitost ustrezata zahtevam, ki jih določajo različne farmakopeje (evropska, japonska in severnoameriška)..

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
    • 2.1 Ploščice agarja s triptikasein sojo
    • 2.2 Ploščice agarja iz tripticasein soje, dopolnjene s krvjo
    • 2.3 Ploščice s sojinim agarjem s tripticaseinom, dopolnjene z ogrevano krvjo
    • 2.4 Klini iz triptikazinovega sojinega agarja
  • 3 Uporabe
  • 4 Seeded
  • 5 Nadzor kakovosti
    • 5.1 Nadzor sterilnosti
    • 5.2 Nadzor rasti
    • 5.3 Kontrola rasti in vzorca hemolize sojinega agarja tripticaseina, dopolnjenega s krvjo
  • 6 Reference

Fundacija

Za pravilen razvoj bakterij je potrebno prisotnost energijskih prispevkov, kot so aminokisline, vitamini, purinske baze in pirimidne.

V tem smislu, triptein in sojin pepton zagotavljata ta hranila mikroorganizmom in tako omogočata njihov polni razvoj. Vendar pa je za zahtevne bakterije ta agar treba dopolniti z defibrinirano kri ali segreto kri, da se poveča njegova obogatitev.

Po drugi strani pa, če se medij doda antibiotikom, postane selektivni medij. Dodate lahko tudi 0,6% kvasnega ekstrakta, ki daje prednost izolaciji vrst iz rodu Listeria, ob dodajanju cistinskega telurita. in Jagnjeta kri je idealna za Corynebacterium diphteriae.

Nazadnje, natrijev klorid daje osmotskemu ravnovesju medij in agar zagotavlja trdno konsistenco.

Priprava

Tripticasein sojine agar plošče

Za pripravo sintetičnega agarja s triptikaseinom je treba 40 g dehidriranega komercialnega medija stehtati na digitalni skali. Raztopi v litru destilirane vode v fioli.

Zmes pustimo stati 5 minut in jo nato spravimo v vir toplote, da pomagamo pri raztapljanju medija. Pogosto jo mešamo in pustimo vreti 1 ali 2 minuti. Nato medij 15 minut steriliziramo v avtoklavu pri 121 ° C.

Pustimo, da se ohladi na 50 ° C in porazdelimo v sterilne petrijevke. Naj se strdi, obrne, naroči v plakete in shrani v hladilnik.

Končni pH medija mora biti 7,3 ± 0,2.

Upoštevati je treba, da je barva dehidriranega gojišča lahka bež barva in shranjena med 10 do 35 ° C v suhem prostoru..

Pripravljen agar je svetlo jantar. Pripravljene plošče shranjujte v hladilniku (2 do 8 ° C) do uporabe.

Plošče morajo pred uporabo doseči sobno temperaturo.

Ploščice s sojinim agarjem s tripticaseinom dopolnjene s krvjo

Krvni agar pripravimo z dodajanjem 5% defibrinirane krvi v času hlajenja s sojinim agarjem triptikaseina pri 50 ° C. Mešanica se homogenizira z vrtenjem z rahlimi gibi.

Postrezite v sterilnih petrijevih posodah. Barva medija mora biti češnjevo rdeča.

Tripticasein sojine agar plošče dopolnjene z ogrevano kri

Za pripravo krvnega agarja na osnovi TSA so zgoraj opisani postopki enaki, toda ko zapustimo avtoklav, pustimo stati, dokler temperatura medija ni približno med 56 in 70 ° C. V tem času se da krv in jo zmeša, dokler medij ne postane rjav.

Postrezite v sterilnih petrijevih posodah. Barva medija je čokoladno rjava.

Noži sojinega agarja triptikaseina

Postopek za pripravo agarja je enak postopku, ki je opisan za plošče, z razliko, da se namesto, da bi služil mediju na petrijevkah, porazdeli med 10 in 12 ml v epruvete s pokrovom bakelita pred sterilizacijo..

Nato epruvete avtoklaviramo pri 121 ° C 15 minut. Ko zapuščajo, se naslanjajo s pomočjo opore in si dovolijo strjevanje.

Pripravljeni klini se posejejo s površino in služijo za vzdrževanje določenih nezahtevnih živih mikroorganizmov za določen čas.

Uporabe

Tripticasein sojin agar se uporablja v naslednjih primerih:

-Kot osnova za pripravo klasičnega krvnega agarja, ki se rutinsko uporablja v večini laboratorijev.

-Izolacija zahtevnih bakterij.

-Opazovanje vzorca hemolize.

-Izvajanje diagnostičnih testov.

-Kot osnova za pripravo posebnega krvnega agarja za Corynebacterium diphteriae, s telurjevim cistinom in Jagnjeta kri.

-Kot osnova za pripravo jagnjetinega agarskega krvi, več kanamicin-vankomicina za rast anaerobov, zlasti Bacteroides sp.

-Za vzdrževanje nezahtevnih sevov (Bacterioteca).

-Mikrobiološko aerobno štetje v mikrobiološki študiji vode, okolja, hrane in kozmetičnih vzorcev.

Poseljeno

Vzorce lahko posadimo neposredno na površino sojinega agarja triptikaseina, dopolnjene s krvjo ali drugimi dodatki. Seje se z izčrpanostjo.

Ker se za subkulturo mikrobnih sevov (bakterij ali kvasovk) običajno uporabljajo plošče s agarjem iz tripticasein soje brez dodatkov;.

Nadzor kakovosti

Kontrola sterilnosti

Za preverjanje sterilnosti različnih medijev, pripravljenih s sojinim agarjem s tripticaseinom, je priporočljivo narediti naslednje: iz vsake pripravljene serije je treba eno ali dve ploščici ali epruveto inkubirati brez inokulacije pri 37 ° C 24 ur, da se dokaže sterilnost. V vseh primerih mora ostati brez rasti.

Če se ugotovi kontaminacija, je treba celotno pošiljko zavreči.

Nadzor rasti

Za proučevanje pravilnega delovanja tripticasein sojinega agarja lahko uporabimo naslednje bakterijske seve: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 in Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Seve so sejali in 24 ur inkubirali pri aerobiozi pri 37 ° C.

V vseh primerih mora biti rast zadovoljiva.

Kot Kompleks lahko uporabite tudi gobe Candida albicans ATCC 10231 in Aspergillus niger ATCC 16404. Pri obeh sevih se pričakuje dobra rast.

Kontrola rasti in vzorec hemolize sojinih agarjev triptikazeina, dopolnjen s krvjo

Za preverjanje pravilnega delovanja krvnega agarja, pripravljenega s to bazo, se lahko uporabijo naslednji sevi: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 in Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Sejejo in 24 ur inkubirajo pri 37 ° C v mikroaerofiliku.

V vseh primerih mora biti rast zadovoljiva, pri tem pa je treba upoštevati. \ T S. pyogenes beta-hemoliza (čisti halo okoli kolonije) in v obeh sevih S. pneumoniae alfa hemoliza (zelenkasto halo okoli kolonij).

Reference

  1. Prispevki Wikipedije. Trypticase Jaz sem agar. Wikipedija, svobodna enciklopedija. 17. december 2018, 15:47 UTC. Na voljo na: https://en.wikipedia.org
  2. Laboratoriji Britania. Tryteine ​​soja agar. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  3. Laboratoriji Neogen Sojin triptih. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik.
  5. BD Laboratories Trypticase Jaz sem Agar. 2014. Na voljo na: .bd.com