Temelj, priprava in uporaba agarske soli in manitola



The solni agar in manitol ali slan manitol je trden, selektiven in diferencialen medij kulture. Ustvaril ga je Chapman za izolacijo patogenih Gram pozitivnih kokov, še posebej Staphylococcus aureus.

Vendar pa je koristno tudi izolirati Staphylococcus epidermidis, ki je včasih lahko prisotna kot oportunistični patogen, in Staphylococcus saprophyticus, med drugimi vrstami.

Nekateri Enterococcus lahko rastejo v tem mediju, kot tudi nekateri gram pozitivni spori, ki tvorijo bacile.

Ta medij je zelo koristen pri analizi kliničnih vzorcev, uporablja pa se tudi pri mikrobioloških študijah živil in pri nadzoru kakovosti industrijskih izdelkov, kot so kozmetika, zdravila, med drugim..

Soljeni manitolski agar je sestavljen iz ekstraktov in peptonov govejega mesa, triptina, manitola, natrijevega klorida, fenol rdečega in agarja..

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
  • 3 Uporabe
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Končne ugotovitve
  • 6 Reference

Fundacija

Mannitol agar je selektiven zaradi visoke koncentracije soli, ki jo ima. Saliniteta deluje kot zaviralna snov in preprečuje rast gram negativnih bakterij.

Razlikuje se tudi zaradi prisotnosti manitolnih ogljikovih hidratov in fenol rdečega indikatorja pH. Iz tega sledi, da bakterije, ki lahko fermentirajo manitol, proizvajajo kisline, ki nakisajo medij, obračajo kolonije in srednje rumeno.

Po drugi strani kolonije, ki ne fermentirajo manitola, rastejo v gojišču ob hranilnih snoveh, ki jih zagotavljajo ekstrakti in peptonas mesa in tripteína. Od tam bakterije ekstrahirajo ogljik, dušik, vitamine in minerale, potrebne za njihovo rast.

Kolonije so v tem primeru lahko šibke ali močne rožnate barve in medij ostane enake barve ali se spremeni v fuksijo.

Agar je snov, ki medij zagotavlja konsistenco.

Priprava

Za pripravo enega litra soljenega manitolnega agarja odtehtamo 111 g dehidriranega medija komercialne hišne preference in raztopimo v 1000 ml destilirane vode z uporabo fiola.

Toplota se aplicira s pogosto odstranitvijo medija za izboljšanje postopka raztapljanja. Pusti vreti za minuto.

Fiolo postavimo v avtoklav pri 121 ° C 15 minut.

Po končanem času se fiola vzame iz avtoklava, pusti stati in vroči med 15 in 20 ml na sterilne petrijevke, ko je temperatura približno 50 do 55 ° C..

Dovoljeno je strjevanje, naročanje v obrnjeni obliki v plaketu in hranjenje v hladilniku do njegove uporabe. Preden vzamete vzorec, morate počakati, da plošča sprejme temperaturo okolja.

Plošče se posejejo z nasaditvijo ali s sijanjem na površino z drigalsko lopatico. Končni pH pripravljenega medija mora biti 7,4 ± 0,2

Barva dehidriranega medija je svetlo beige in barva pripravljenega medija je oranžno rdeča.

Uporabe

Zaradi visoke selektivnosti je ta medij idealen za sajenje vzorcev z mešano floro, v kateri se želi iskati prisotnost Staphylococcus aureus, kot glavni povzročitelj tega rodu.

V tem smislu je ena izmed njenih najpogostejših uporab mikrobiološka analiza vzorcev izcedkov žrela in izcedka iz nosu, zlasti za odkrivanje asimptomatskih nosilcev S. aureus.

Nekatere države so to analizo uvedle kot obvezno zahtevo za ljudi, ki želijo delati kot prodajalci hrane.

Ta nadzor preprečuje najem ljudi, ki so nosilci S. aureus, tako se izognemo množični zastrupitvi s hrano, zaradi uživanja živil, kontaminiranih s stafilokoknim enterotoksinom.

Lahko je vključen tudi v sejanje okužb ran, krvnih kultur, CSF, bronhoalveolarnega izpiranja, med drugim..

Soljeni manitol agar je uporaben za ponovno izolacijo kolonij urinskih kultur iz CLED agarja ali krvnega agarja, katerega Gram je pokazal Gram-pozitivne koke v grozdih..

Velja tudi pri mikrobiološki analizi hrane, pitne vode, tal, med drugimi aplikacijami.

Nadzor kakovosti

Ko se pripravi serija plošč s soljenim manitolnim agarjem, je priporočljivo izvesti kontrolo kakovosti. Kontrolni sevi so posejani, da se pokaže, ali je rast ali ne.

Kot pozitivno kontrolo so znani sevi Staphylococcus aureus. Ustrezno mora rasti z razvijanjem rumenih kolonij, medij pa postane tudi iste barve.

Prav tako je primerno vključiti znani sev Staphylococcus epidermidis. Ustrezno mora rasti z rožnatimi kolonijami, medij pa ostane enake barve ali potemni v močnejši rožnati barvi.

Kot negativna kontrola se uporabljajo sevi, ki ne smejo rasti v tem mediju. Na primer, lahko posadite znan sev Escherichia coli ali Klebsiella pneumoniae. Pričakovani rezultat je popolna inhibicija, to je brez rasti.

Poleg tega je treba inkubirati ploščo brez inokulacije. V njej ne bi smelo biti rasti, ni spremembe barve.

Pomembno je, da se plošča ne uporablja, če med drugim obstajajo znaki poslabšanja, kot so kontaminacija, dehidracija, razbarvanje..

Končne ugotovitve

Pri uporabi soljenega gojišča za manitol je treba upoštevati nekatere pomembne vidike:

-Pridobivanje rasti rumenih kolonij ne pomeni, da je Staphylococcus aureus. Ne smemo pozabiti, da so nekateri sevi Enterococcusa sposobni rasti v tem mediju in fermentirati manitol, kot tudi nekatere gram pozitivne bacile, ki tvorijo spore..

Zato je pomembno, da koloniji opravimo Gram in test katalaze.

-Po drugi strani pa je treba upoštevati, da se druge vrste stafilokokov razlikujejo od drugih vrst aureus Prav tako so sposobni fermentirati manitol. Zato je pomembno, da se kolonija goji na hranilno brozgo, ki jo vzamemo od tam, in opravimo koagulazni test..

Med vrstami Staphylococcus, ki so klinično pomembne za človeško fermentiranje manitola, so: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, med drugim.

Drugi lahko spremenljivo reakcijo, to je včasih pozitivno in včasih negativno. Nekateri so S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, med drugim.

-Za izvajanje koagulaznega testa ni priporočljivo jemati kolonij neposredno iz manitolnega agarja, ker lahko visoka koncentracija soli v mediju vpliva na rezultat..

-Nazadnje je priporočljivo inkubirati plošče, ki so zasejene s soljenim manitolom, do 48 ur, ker nekateri sevi \ t S. aureus Lahko počasi fermentirajo manitol, čeprav to ni zelo pogosto.

Reference

  1. Laboratoriji Britania. Manitol slan agar. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  2. "Slan Manitol Agar". Wikipedija, Prosta enciklopedija. 31. okt. 2018, 19:08 UTC. 17. januar 2019, 20:55, na voljo na: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana S.A..
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik
  5. BD Laboratories BD Mannitol Salt Agar. 2013. Na voljo na: bd.com.