Temelj, pripravo in uporaba papa dekstroze



The papa dekstrozni agar je trdno, neselektivno hranilno gojišče. Lahko goji bakterijske in glivične vrste, vendar je njegova uporaba posebej označena za izolacijo nitastih gliv in kvasovk. Znan je tudi kot PDA medij s strani angleškega izraza Potato dekstrozni agar.

Še posebej je koristen za izolacijo fitopatogenih gliv, to je tistih, ki vplivajo na rastline. Za posaditev vzorcev iz okuženih rastlin se lahko uporabijo drugi mediji, kot je Sabouraud agar ali malta agar, toda za rutinsko uporabo je prednostni agar za krompirjev dekstrozo zaradi večje sporulacije..

Uporablja se tudi za štetje glivičnih kolonij v vzorcih kozmetike, farmacevtskih izdelkov in nekaterih mlečnih živil. Prav tako je primerna za posaditev vzorcev ostankov kože v iskanju dermatofitov, ki zelo dobro rastejo v tem mediju in razvijajo svoje značilne pigmente..

Sredstvo iz krompirjeve dekstroze je zelo preprosto in enostavno pripraviti v laboratoriju. Vsebuje, kot že ime pove, infuzijo krompirja, dekstrozo in agar-agar. Dodatno lahko dodamo inhibitorne snovi, da preprečimo rast bakterij in povečamo selektivnost za glivične vrste.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
    • 2.1 - Domaća (nekomercialna) priprava papa dekstroznega agarja
    • 2.2 - Komercialna priprava papa dekstroznega agarja
  • 3 Uporabe
    • 3.1 Postopek sajenja rastlinskih vzorcev na krompirjevem dekstroznem agarju
    • 3.2 Postopek za sajenje vzorcev kože, lase ali lusk na nohtih na papo dekstroznem agarju
    • 3.3 Postopek identifikacije
    • 3.4 Število kolonij
    • 3.5 Vzdrževanje glivičnih sevov
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Reference

Fundacija

Papa dekstrozni agar je gojišče, ki zagotavlja potrebne prehranske elemente za razvoj filamentoznih gliv in kvasovk..

Kombinacija infuzije krompirja z glukozo je popoln vir energije za zadovoljivo rast gliv. Medtem ko je agar tisti, ki zagotavlja skladnost z okoljem.

Samo medij ne zavira rasti bakterij, zato je neselektivni medij. Da bi bila selektivna, potrebujete dodatek inhibitornih snovi, kot je vinska kislina ali antibiotiki.

Priprava

-Domaći (nekomercialni) pripravek krompirjevega dekstroznega agarja

Petrijevke

Pripravljen je na naslednji način:

Najprej se krompir dobro opere, odstranijo umazanijo, ki jo imajo. Narezani so na tanke rezine z vsem in lupino. 200 g krompirja stehtamo in pustimo vreti v liter destilirane vode pol ure.

Po tem času se filtrira ali napne vse pripravke skozi gazo.

Dobljeno tekočino dopolnimo z destilirano vodo, dokler ne doseže enega litra. V infuzijo dodamo 20 g agar-agarja in 20 g dekstroze, dobro premešamo in avtoklaviramo pri 121 ° C, pri 15 funtih tlaka 15 minut..

Pustimo, da se ohladi na 50 ° C in postrežemo v sterilne petrijevke. Pripravljene plošče shranjujemo v hladilniku.

Klini

Prav tako lahko pripravite papa dekstrozni agar klin.

V tem primeru se pred sterilizacijo v avtoklavu 12 do 15 ml medija postavi v epruvete, nato se avtoklavirajo in po odhodu ležijo na posebnih oporah, dokler se ne strdijo. Prihranite v hladilniku.

Medij ostane pri pH 5,6 ± 0,2, vendar nekateri laboratoriji dodajo 10% vinsko kislino, da znižajo pH na 3,1 ± 0,1, da bi preprečili rast bakterij..

V tem smislu drugi laboratoriji raje dodajajo antibiotike, da so selektivni za gojenje gliv in preprečujejo razvoj bakterij..

-Komercialna priprava krompirjevega dekstroznega agarja

Odtehtamo 39 g komercialno dostopnega dehidriranega medija in raztopimo v enem litru destilirane vode. Pustite v mirovanju 5 minut.

Zmes segrejemo s pogostim mešanjem do popolnega raztapljanja. Nato 15 minut steriliziramo v avtoklavu pri 121 ° C.

Pripravijo se lahko plošče ali klini. Nadaljujte, kot je opisano zgoraj.

PH ostane 5,6 ± 0,2. Če je želen pH 3,1, je treba pred serviranjem na ploščo dodati 14 ml 20% sterilne vinske kisline..

Barva nepripravljenega gojišča je bež in pripravljena je svetlo rumena z rahlo motnim ali opalescentnim videzom.

Uporabe

Postopek sajenja rastlinskih vzorcev v krompirjevem dekstroznem agarju

-Za liste z lisami

Listi se razrežejo na kose.

V 50-cm kozarcu s 50-odstotnim alkoholom položite koščke listov (obarvane in zdrave dele), da površino razkužite 20 do 30 sekund. Potegnite alkohol in dodajte 20% natrijevega hipoklorita 40 do 50 sekund, če so tanke liste in podaljšajte čas na 80 sekund, če je lubje in hlodi.

Povlecite natrijev hipoklorit in vzemite s sterilnim posnetkom razkužene kose in jih položite na površino medija (največ 10 kosov). Datum namestite in inkubirajte od 20 do 30 ° C.

-Za sadje in gomolje

Če je sadje mesnato, odprite sadje, ki ga prizadene gliva, in vzemite koščke s sterilnim skalpelom, obolelim delom in zdravim delom, ter ga položite na površino agarja..

Če je sadje citrusov, kot je limona ali oranžna, morate odpreti in sejati svoje seme.

Ko je površina plodu prizadeta in so opazne spore, je najbolje uporabiti naribano metodo na plošči; sestoji se iz dotikanja spore z lopatico v obliki "L", steriliziranega in ohlajenega, nato pa se na agarju opravi cik-cak sejanje..

-Za zrna

Dezinficirajo se, kot je opisano v listih, nato jih položijo na agar.

-Za veje in stebla

Izvajajo se strganje lubja, nato se koščki zdravega in obolelega dela odvzamejo in posejejo neposredno na agar..

Zasičene plošče inkubiramo v aerobiozi pri 20-30 ° C 72 ur.

Postopek za sajenje vzorcev kože, lase ali luske za nohte na papo dekstroznem agarju

Vzorec je treba vzeti z uporabo rezila skalpela št. 11, bodisi za rezanje prizadetih las, kožnih kosmičev ali nohtov pri iskanju dermatofitov. Preden vzamete vzorec, morate območje razkužiti s 70% alkoholom.

-Vzorec kože

Pri luskastih lezijah je treba poškodovati rob lezije, saj obstaja večja verjetnost, da se najde gliva.

V eksudativnih lezijah vzorec vzamemo s suhim ali mokrim brisom. Seje se takoj na krompirjev dekstrozni agar ali Sabouraud agar. Izogibajte se prevoznim sredstvom.

Druga metoda vzorčenja je skozi kvadratno tehniko preproge Mariat in Adan Campos. V tem primeru se prizadeto območje 5-krat obriše s kosom sterilne volne za nadaljnjo obdelavo.

Vzorec lahko postavimo neposredno v gojišče.

-Vzorec las

Glede na patologijo lahko prizadeti del izrežemo ali odtrgamo s koreninami. Vzorec postavimo v gojišče.

-Vzorec nohtov

Lahko strgate ali odrežete določen del prizadetega nohta. To bo odvisno od vrste poškodbe.

Pred sejanjem vzorec razrežemo na kose 1 mm, da bi povečali verjetnost stika glivice z gojišče..

Postopek identifikacije

Kolonije, pridobljene na plošči, izoliramo v epruvetah, ki vsebujejo krompirjev dekstrozni agar, da izvedemo makroskopsko študijo kolonij (videz, barva, konsistenca, stopnja razvoja)..

Mikroskopska študija (opazovanje struktur in njihovih formacij) se lahko izvede z mikrokulturami ali neposredno opazovanjem pod mikroskopom med plasti in lamelo..

Število kolonij

Ta medij se lahko uporablja tudi za določanje obremenitve gliv in kvasovk, prisotnih v rastlinskih vzorcih, hrani, kozmetiki ali zdravilih. V ta namen se uporabi papa dekstrozni agar, dopolnjen z antibiotiki, kot so: (kloramfenikol, klorotetraciklin ali oba).

V sterilno in prazno petrijevko napolnimo 1 ml vzorca - po možnosti razredčenega -, nato raztopimo čep iz agarskega krompirjevega dekstroze in ohladimo na 45 ° C. Prelijemo po petrijevki in vrtimo, dokler se ne homogenizira. Pustite ga počivati, dokler se ne strdi.

Inkubiramo v aerobiozi pri 20-25 ° C (plesni) ali pri 30-32 ° C (kvas) za 5 do 7 dni ali več, odvisno od vrste glive, ki jo iščete, in vrste vzorca. Za inkubacijo v obeh temperaturnih območjih se lahko uporabita dve ploščici.

Vzdrževanje glivičnih sevov

Papa dekstrozni agar se lahko uporablja za vzdrževanje vitalnih sevov gliv več let.

V ta namen se glive gojijo na papinih dekstroznih klinskih klinah in ko se glive gojijo, se prekrije z mineralnim oljem. Olje je treba 45 minut sterilizirati v avtoklavu in imeti približno viskoznost od 300 do 330 Saybolta. Olje naj presega poševno konico za 1 do 2 cm.

Nadzor kakovosti

Iz vsake pripravljene serije je treba vzeti eno ali dve ploščici in inkubirati 48 ur pri 25 ° C ali 96 ur pri 20 ° C. Dober nadzor sterilnosti je tisti, v katerem ni razvoja kolonij.

Znani ali potrjeni kontrolni sevi, kot so: \ t

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. V vseh primerih se pričakuje dobra rast.

Reference

  1. Laboratoriji Britania. Papa glukozado agar. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  2. Laboratoriji Neogen Krompirjev dekstrozni agar. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  3. Laboratorij za insumolab Krompirjev dekstrozni agar. Na voljo na: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. Splošna mikologija. 1994. 2. Ed Universidad Central de Venezuela, Knjižnične izdaje. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Vrednotenje mikrobiološke kakovosti v senčilu, kompaktni tip prahu nacionalnega proizvodnega laboratorija, po referenčni metodi farmakopeje 2005. Univerza San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Obdelava površinskih vzorcev. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; str. 1-12