Temelj, priprava in uporaba hranilnega agarja



The hranilni agar gre za neselektivno in nediferencirano trdno gojišče. V tem okolju rastejo vse vrste bakterij, ki ne zahtevajo prehranskega vidika.

Je preprosto sredstvo in kljub svojemu imenu vsebuje nižjo hranilno vrednost v primerjavi z drugimi podobnimi mediji, kot so agar z infuzijo v možganih ali sojin agar iz tripticaze..

Njegova uporabnost v laboratoriju je zelo raznolika. V glavnem se uporablja za subkulturo vrst, vzdrževanje sevov, štetje kolonij, kot podlago za pripravo krvnega agarja,.

Prav tako, zaradi svetlo bež barve, proizvodnja pigmentov, ki jih ustvarjajo nekateri bakterijski sevi, kot je zelenkast pigment Pseudomonas aeruginosa, opečeni rdeči pigment, ki ga proizvaja Serratia marcescens pri sobni temperaturi, zlato rumeni pigment Staphylococcus aureus, med drugim.

Poleg tega je eden najbolj ekonomičnih rastočih medijev na trgu.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Sestava
  • 3 Priprava
  • 4 Uporabe
    • 4.1 Kot osnova za pripravo krvnega agarja
    • 4.2 Spodbujanje sporulacije bakterij, ki tvorijo spore
    • 4.3 Vzdrževanje deformacij
    • 4.4 Štetje kolonij
    • 4.5 Izvajanje diagnostičnih testov
    • 4.6 Izkoriščanje mezofilnih aerobnih rekreativnih slanih voda (plaže)
  • 5 Reference

Fundacija

Kot smo že omenili, gre za zelo preprosto sredstvo, ki temelji na zagotavljanju hranilnih snovi za rast bakterij brez omejitev in brez zapletenih reakcij za interpretacijo..

Ker je medij prosojen, je idealen za štetje kolonij po metodi setev po globini.

Sestava

Sestavljen je predvsem iz mesnega ekstrakta ali kvasnega ekstrakta, peptonov ali prebavil iz trebušne želatine, agar-agarja, natrijevega klorida in destilirane vode..

Ekstrakt mesa ali kvasa in peptonov predstavlja vir ogljika in esencialnih mineralov (dušik, fosfor in žveplo), ki jih bakterije uporabljajo kot vir energije in rastni dejavniki..

Podobno je agar-agar osnova vseh trdnih rastnih substratov, ki nadomeščajo želatino, ki je bila prva bazična spojina, ki jo je uporabil Robert Koch, da je njegova medijska trdna konsistenca..

Agar je polisaharid, sestavljen iz galaktoze, galaktomanana, agaroze in agaropectina. Nastavi pri 40 ° C in se topi blizu 100 ° C.

Natrijev klorid zagotavlja medij z osmolarnostjo, potrebno za razvoj bakterij.

Končno voda služi za hidratacijo in raztapljanje liofiliziranih spojin. Uporabiti je treba destilirano vodo, nastavljeno na nevtralni pH. Voda iz pipe se ne sme uporabljati, ker vsebuje kalcij in magnezij, ki lahko reagirata s fosfati v mediju in tvorita netopne soli..

Priprava

Za en liter hranilnega agarja je treba stehtati 31 g dehidriranega medija. Postavimo ga v fiolo in raztopimo v litru destilirane vode. Po 5 minutah počitka segrejemo preko vira toplote in neprestano mešamo, dokler ne zavre 1 ali 2 minuti.

Nato fiolo postavimo v avtoklav in steriliziramo pri 121 ° C 20 minut.

Ob koncu časa se odstrani iz avtoklava in postreže s sterilnimi petrijevkami z uporabo laminarnega pokrova ali Bunsenovega gorilnika..

Če so petrijevke za enkratno uporabo (plastika), je treba medij porazdeliti, ko ima agar temperaturo približno 50 ° C, da se prepreči njihovo deformiranje zaradi prekomerne toplote..

Pustite, da se strdi in shranite v obrnjeni nosilec plošče in hranite pri 2-8 ° C do uporabe.

Plošče morajo biti pred sejanjem kaljene. Hranilne tablice agarja se ne smejo uporabljati, če so kontaminirane ali dehidrirane.

PH pripravljenega medija je treba prilagoditi na 7,3 ± 0,2.

Uporabe

Je najpreprostejši medij kulture, ki se uporablja v mikrobiološkem laboratoriju. Njegova formulacija je odlična za rast nezahtevnih bakterij.

Njegove glavne uporabe so pojasnjene v nadaljevanju:

Kot osnova za pripravo krvnega agarja

Ta medij se včasih uporablja kot osnova za pripravo krvnega agarja, vendar ni najpogosteje uporabljena baza.

Spodbujanje sporulacije bakterij, ki tvorijo spore

Ta medij kulture je še posebej uporaben za stimulacijo sporulacije bakterij, ki tvorijo spore, kot npr Bacillus sp.

V ta namen se poseje rod vrste Bacillus in inkubiramo 24 ur pri 37 ° C v aerobiozi. Ko se kolonije gojijo, se plošča izpostavi stresu s temperaturo, to pomeni, da se temperatura peči poveča na 44 ° C in pusti 24 ur več ali se vnese v hladilnik 24 ur..

Na koncu pridelka se kulture razširijo in obarvajo z barvilom po Gramu ali barvilom spore Shaeffer-Fulton. V njih bodo opazili bacile z endospori (spore znotraj bacila) in eksosporami (spore zunaj bacila)..

Vzdrževanje deformacij

Nekateri raziskovalni laboratoriji ali univerzitetni podporni laboratoriji za vzdrževanje morajo čim dlje vzdrževati klinično pomembne bakterije, da lahko uporabljajo bakterijsko banko (bacteriotheca) za raziskovalno delo ali za pripravo učnih praks. Učenci se bodo naučili manipulirati in identificirati te mikroorganizme.

V ta namen lahko uporabimo hranilni agar in agar z možgansko srčno infuzijo. Agar pripravimo, nalijemo v epruvete z bakelit-pokrovom in nagnemo na podlago, tako da se agar strdi in tvori blok na dnu in poševno na površini (vrh piščali)..

Vsaka epruveta je označena z imenom bakterij, ki jih je treba zasaditi, in datumom. Na okvirju bo vsaka bakterija zasajena in inkubirana 24 ur, ko bodo kolonije gojene, cevi shranjene pri sobni temperaturi.

Bakterioteko je treba obnoviti od 1 do 3 mesecev, da se prepreči kontaminacija in dehidracija medija ter smrt bakterij..

Na ta način lahko ohranimo samo nezahtevne bakterije.

Štetje kolonij

Čeprav obstajajo specializirana sredstva za štetje kolonij, kot je standardni agar za štetje, se lahko za ta namen uporabi hranilni agar, bodisi s setvijo na površino z drigalsko lopatico ali z globino. Zato je zelo uporaben pri mikrobiološki analizi hrane in vode.

Izvajanje diagnostičnih testov

Ker gre za medij, ki ne vsebuje krvi ali katerega koli drugega dodatka, je idealno, da kolonije, gojene v tem mediju, opravijo test katalaze..

Prav tako je zaradi svoje jasne barve navedeno, da opravlja oksidazne teste neposredno na območju zasejanega agarja, brez motenj..

Obnova mezofilnih aerobnih rekreativnih slanih voda (Plaže)

Hranilni agar, pripravljen z 10% morske vode, je koristen za vrednotenje mezofilnih aerobov v morskih vodah.

Na ta način lahko cenimo stopnjo dejanske kontaminacije, ki jo imajo vode s temi mikroorganizmi, saj se pri tej vrsti vzorcev rezultati prekrivajo pri uporabi gojišča, pripravljenega na običajen način..

To so dokazali Cortez et al. leta 2013 v raziskovalnem prispevku.

To je mogoče pojasniti zaradi nenadne spremembe, ki jo bakterije izvajajo, ko prehajajo iz hiper-slanega okolja v okolje z nizko vsebnostjo soli, zato mikroorganizmi vstopijo v stanje letargije, v kateri so sposobni preživetja, vendar ne obdelujejo..

Reference

  1. "Hranljivi agar." Wikipedija, Prosta enciklopedija. 13 Sep 2016, 20:33 UTC. 29 dec. 2018, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana S.A..
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vpliv gojišča kulture, pripravljenega z morsko vodo, na zdravstvene kazalnike v morskih vodah zdravilišča Chichiriviche, država Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M in Cardoso M. Mikrobiološka kakovost vode za inseminacijske odmerke, za Suinos.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinična mikrobiologija. Univerza v Cadizu, 2. izdaja. Služba za publikacije UCA.