MacConkey Agar temelj, priprava in uporaba

The MacConkey agar Je trden gojišče kulture, ki omogoča izključno izolacijo gram negativnih bacilov. Zato je selektivni medij in omogoča tudi razlikovanje med fermentacijo in nefermentacijo laktoze, zaradi česar je diferencialno sredstvo. Je eno izmed najbolj razširjenih kulturnih medijev v mikrobiološkem laboratoriju.

Ta medij se uporablja predvsem za izolacijo gram negativnih bacilov, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae, vključno z oportunističnimi in enteropatogenimi vrstami.

Lahko se uporablja tudi za izolacijo drugih enteričnih bacilov, ki prebivajo v prebavnem traktu, vendar ne pripadajo Enterobacteriaceae, kot Aeromonas sp, Plesiomonas sp, med drugim.

Končno lahko izolira druge gram-negativne, nefermentacijske glukozne bacile, ki jih najdemo v okolju, vodi ali tleh, vendar so včasih oportunistični patogeni, kot so Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alkaline sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, med drugim.

Indeks

• 1 Fundacija
  • 1.1 Agar MacConkey
• 2 Priprava
• 3 Uporaba običajnega agarja MacConkey
• 4 Druge variante MacConkey agarja
  • 4.1 Macconkey agar s sorbitolom
  • 4.2 MacConkey Agar brez kristal violeta ali soli
  • 4.3 Macconkey agar s cefoperazonom
  • 4.4 Agar MacConkey, pripravljen z 10% morske vode v / v
• 5 Reference

Fundacija

MacConkey Agar

Temelj tega medija je mogoče razložiti z opisom njegovih sestavnih delov, saj vsak ima namen, ki določa njegovo lastnost.

Žolčne soli in vijolični kristali

V tem smislu ima MacConkey agar kompleksno sestavo. Najprej vsebuje žolčne soli in vijolični kristal.

Ti elementi so odgovorni za zaviranje rasti Gram-pozitivnih bakterij in nekaterih zahtevnih gram-negativnih bacilov. V zameno pa spodbuja razvoj gram negativnih bacilov, na katere te snovi ne vplivajo. Zato je selektivni medij.

Rečeno je, da je rahlo selektivna v primerjavi z drugimi mediji, ki prav tako zavirajo rast Gram-pozitivnih bakterij in tudi večine Gram-negativnih bakterij..

Je izredno selektiven za določen rod, kot je TCBS agar za izolacijo Vibrio cholerae in druge podobne halofilne in alkalofilne vrste.

Peptoni, polipektoni in laktoza

Vsebuje snovi, ki zagotavljajo potrebna hranila mikroorganizmom, ki se razvijajo v tem mediju, kot so peptoni, polipektoni in laktoza..

Laktoza je ključna točka za medij kot diferencialno sredstvo, saj bodo mikroorganizmi, ki lahko fermentirajo laktozo, razvili močne rožnate kolonije..

Nekatere bakterije lahko fermentirajo laktozo počasi ali šibko, razvijejo bledo rožnate kolonije in ostanejo pozitivne laktoze.

Tisti, ki ne fermentirajo laktoze, uporabljajo peptone kot vir energije, ki proizvaja amoniak in alkalizira medij. Zato so kolonije, ki izvirajo, brezbarvne ali prozorne.

Indikator PH

Sprememba barve se doseže z drugo bistveno sestavino, ki ima MacConkey agar. Ta spojina je indikator pH, ki je v tem primeru nevtralen rdeč.

Fermentacija laktoze ustvarja proizvodnjo mešanih kislin. Sredstvo se nakisajo pri pH pod 6,8..

To povzroči, da se indikator pH obrne v smeri intenzivnega roza odtenka. Intenzivnost barve se lahko spreminja glede na končni pH.

Destilirana voda, natrijev klorid in agar

Po drugi strani pa vsebuje destilirano vodo in natrijev klorid, ki mediju dajejo hidracijo in osmotsko ravnotežje. Končno, medij vsebuje agar, ki je osnova, ki zagotavlja konsistenco trdnega medija.

Pripravljen gojišče agarja MacConkey mora imeti končni pH, prilagojen na 7,1 ± 0,2..

Priprava

Za en liter agarja MacConkey je treba stehtati 50 g dehidriranega medija, nato ga postaviti v fiolo in raztopiti v enem litru destilirane vode. Po 10 minutah mirovanja se segreva z neprestanim mešanjem, dokler ne vre 1 minuto.

Nato fiolo postavimo v avtoklav in steriliziramo pri 121 ° C 20 minut. Ob koncu časa odstranimo iz avtoklava in pustimo, da se ohladi na temperaturo 45 ° C, nato serviramo v sterilne petrijevke v pokrovu laminarnega toka ali pred Bunsenovim gorilnikom..

Pustite, da se strdi in shranite v obrnjeni nosilec plošče in hranite pri 2-8 ° C do uporabe.

Da dobimo MacConkey agar, ki zavira učinek bruhanja, ki ga povzroča rod Proteus, uporabljamo MacConkey agar z nizko vsebnostjo soli..

Uporaba običajnega agarja MacConkey

MacConkey agar je vključen v vse množice kulturnih medijev, razporejenih za setev kliničnih vzorcev, prejetih v laboratoriju. Uporaben je tudi v mikrobiologiji hrane in okoljski mikrobiologiji.

Različni gram negativni bacili, ki rastejo v tem mediju, izražajo fenotipske značilnosti, ki pomagajo pri domnevni diagnozi zadevne vrste. Na primer, velikost, barva, konsistenca in vonj kolonij so nekatere značilnosti, ki lahko vodijo.

V tem okolju, vrste Escherichia coli, Klebsiella sp in Enterobacter sp tvorijo močne rožnate kolonije, obdane z območjem oborjenega žolča.

V toliko bakterijah kot Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp in Hafnia sp po 24 urah se lahko pojavijo brez barve ali bledo roza v 24-48 urah.

Prav tako rodovi Proteus, Edwadsiella, Salmonella in Shigella proizvajajo brezbarvne ali prosojne kolonije..

Druge variante MacConkey agarja

Obstajajo tudi druge variante MacConkey agarja, ki imajo posebne namene. Nato so omenjeni:

MacConkey agar s sorbitolom

Ta medij je bil zasnovan za razlikovanje enteropatogenega seva (Escherichia coli enterohemoragične O157: H7) preostalih sevov Escherichia coli.

Ta medij spremeni ogljikove hidrate laktozo za sorbitol. Sevi. \ T E. coli enterohemoragični O157: H7 se razlikujejo od ostalih, ker ne fermentirajo sorbitola in zato se pridobijo prosojne kolonije, vendar pa preostali sevi E. coli če fermentirajo sorbitol in so kolonije močno rožnate.

MacConkey Agar brez kristal violeta ali soli

Ta agar se zelo razlikuje od klasičnega agarja MacConkey, saj nima kristal violeta, lahko pa se po Gramu pozitivne bakterije razvijejo.

Po drugi strani pa odsotnost soli zavira nastanek rojevanja na agarju, ki ga povzročajo nekateri enterični bacili, kot so tisti iz rodu Proteus, in tako olajša izolacijo vseh prisotnih bakterij, vključno z Gram-pozitivnimi bakterijami.

MacConkey agar s cefoperazonom

Ta varianta MacConkey agarja je bila zasnovana tako, da se najprej izolira Laribacter hongkongensis in kasneje so spoznali, da je to koristno za izolacijo Arcobacter butzleri. AOba sta rahlo ukrivljena negativna Gramska bacila, odporna na cefoperazon.

Te bakterije so bile nedavno povezane kot vzroki za gastroenteritis in drisko, pridobljene pri azijskih in evropskih posameznikih, ki se pojavljajo kot dva močna nastajajoča patogena..

Antibiotik omogoča zaviranje spremljevalne flore prebavil, ki spodbuja razvoj teh bakterij in jim preprečuje, da bi ostala neopažena, saj potrebujejo 72 ur za rast..

MacConkey Agar, pripravljen z 10% morske vode v / v

Ta varianta je uporabna za vrednotenje bakterijskih zdravstvenih kazalcev fekalne kontaminacije, vključno s popolnimi koliformnimi in fekalnimi koliformnimi bakterijami v rekreacijskih slanih vodah (plaže in zalivi)..

Cortez in sodelavci 2013 so pokazali, da tako pripravljen medij znatno poveča izkoristek teh mikroorganizmov v slanem okolju v primerjavi z uporabo agarja MacConkey, pripravljenega z destilirano vodo..

Razlog za to je, da modificirani medij stimulira rast bakterij, ki so fiziološko v stanju mirovanja, "sposobne za življenje, vendar ne za gojenje", zato jih ni mogoče predelati v običajnih medijih..

Reference

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Uporaba cefoperazona MacConkey agar za selektivno izolacijo Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. "MacConkey Agar." Wikipedija, Prosta enciklopedija. 4 Apr 2018, 18:16 UTC. 29 dec. 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana S.A..
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vpliv gojišča kulture, pripravljenega z morsko vodo, na zdravstvene kazalnike v morskih vodah zdravilišča Chichiriviche, država Falcón, Venezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinična mikrobiologija. Univerza v Cadizu, 2. izdaja. Služba za publikacije UCA.