Agar LIA (Lizin železo) temelj, priprava in uporaba



The LIA agar (Lizinski železo) je biokemični test, ki se uporablja za identifikacijo bakterij iz družine Enterobacteriaceae. Ta medij so ustvarili Edwards in Fife na podlagi Falkowove formule.

Prvotno je bil ta test bujon, ki je vseboval peptone, kvasni ekstrakt, glukozo, L-lizin, bromokrezol vijolično in destilirano vodo. Edwards in Fife sta dodala agar-agar, železov amonijev citrat in natrijev tiosulfat.

Preskus v osnovi sestoji iz dokazovanja prisotnosti encima lizin dekarboksilaze, ki je sposoben reagirati s karboksilno skupino aminokisline L-lizina. Deaminacija aminokisline se lahko pojavi tudi zaradi prisotnosti encima lizin deaminaze.

Poleg tega sestava medija omogoča dokazati sposobnost nekaterih bakterijskih rodov, da proizvajajo vodikov sulfid. Končno je možno opazovati tudi proizvodnjo plina ali ne v sredini.

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Peptoni in izvlečki kvasa
    • 1.2 Glukoza
    • 1,3 L-lizin
    • 1.4 Indikator pH (bromokrezol vijolična)
    • 1.5 Amonijev železov citrat in natrijev tiosulfat
  • 2 Razlaga preskusa
    • 2.1 Dekarboksilacija lizina
    • 2.2 Deaminacija lizina
    • 2.3 Proizvodnja vodikovega sulfida (H2S)
  • 3 Zapis rezultatov
  • 4 Priprava
  • 5 Uporabe
  • 6 Reference

Fundacija

Peptoni in izvlečki kvasa

Kot večina gojitvenih medijev, tudi železov lizinski agar vsebuje sestavine, ki zagotavljajo vir hranil, potrebnih za rast bakterij. Te sestavine so predstavljene z peptoni in ekstraktom kvasa.

Glukoza

Tudi ta agar vsebuje ogljikove hidrate, ki lahko fermentirajo. Znano je, da vse bakterije iz družine Enterobacteriaceae fermentirajo glukozo.

Ta korak je ključnega pomena, ker bo odgovoren za kisanje medija, ki je bistven pogoj za encim lizin dekarboksilazo, če je prisoten, da deluje na njen substrat..

Pri nekaterih bakterijskih rodovih lahko opazimo nastajanje plina zaradi fermentacije glukoze.

Plin se zabeleži, ko je v epruveti premestitev agarja, pri čemer pusti prazen prostor na dnu epruvete ali z razpokanjem medija v dveh ali več delih..

L-lizin

Ko je lizin dekarboksiliran, se tvorita diamin (cadaverin) in ogljikov dioksid.

Dekarboksilacija poteka v prisotnosti koencima piridoksal fosfata. Ta reakcija je nepovratna.

Indikator PH (bromokrezol vijolična)

Vse spremembe pH, ki so se pojavljale v mediju z različnimi reakcijami, se zaznajo z indikatorjem pH v bromokrezolu.

V tem smislu, ko pride do zakisljevanja, medij postane rumene barve in ko je alkalizacija, se medij vrne v prvotno vijolično ali vijolično barvo..

Ko se dezaminacija lizina pojavi zaradi prisotnosti encima lizin deaminaze, se na površini pojavijo rdečkaste barvne oblike, značilne za rodove Proteus, Providencia in nekatere vrste Morganella..

To je posledica dejstva, da se med procesom deaminacije tvori alfa-keto-karbonska kislina, ki reagira z amonijevim citratom v prisotnosti kisika, kar povzroči prej omenjeno barvo..

Amonijev železov citrat in natrijev tiosulfat

Na drugi strani bakterije, ki proizvajajo vodikov sulfid, bodo dokazane s prisotnostjo natrijevega tiosulfata (vir žvepla) in železovega amonijevega citrata, ki je razvijalec H2S.

Bakterije, ki imajo encim tiosulfat-reduktazo, lahko delujejo tako, da zmanjšajo prisotnost natrijevega tiosulfata, pri čemer tvorijo sulfit in vodikov sulfid (H)2S).

Slednji je brezbarven plin, ko pa reagira z železovo soljo, tvori kovinski železov sulfid, ki je netopna spojina (vidna črna oborina)..

Vendar pa je sposobnost nastajanja H2S s tem medijem ni zelo zanesljiv, ker lahko nekatere negativne lizinske dekarboksilazne bakterije proizvajajo H2S ne bo tvoril črne oborine, ker kislost medija vpliva. Zato je priporočljivo preveriti z drugimi sredstvi, ki vsebujejo železo.

Razlaga preskusa

Dekarboksilacija lizina

Epruvete je treba prebrati po 24 urah inkubacije, sicer obstaja nevarnost napačne interpretacije reakcije, pri čemer se sporočijo napačni rezultati.

Ne smemo pozabiti, da bo prva reakcija, ki se bo zgodila, fermentacija glukoze, zato bodo vse cevi po 10 do 12 urah rumene..

Če se ob koncu inkubacijske dobe (24 ur) opazi rumena podlaga z vijolično ali vijolično površino, je reakcija negativna. Vijolična barva površine ustreza alkalizaciji medija z uporabo peptonov.

Pozitivna reakcija je tista, pri kateri sta dno in površina cevi popolnoma vijolična, kar pomeni, da se vrne v prvotno barvo.

Torej, kdo ugotovi pozitivnost testa, je osnova ali dno medija. Če dvomite o barvi, jo lahko primerjate z neinokulirano cevjo LIA.

Deaminacija lizina

Cev, ki dokazuje deaminacijo lizina, bo imela rdečkasto rjavo površino in rumeno ozadje (kislino) ali celotno rdečkastorjavo cev..

Ta reakcija je interpretirana kot negativna za dekarboksilacijo lizina, vendar pozitivna za deaminacijo lizina.

Ta reakcija je definirana in interpretirana v stožčasti obliki.

Proizvodnja vodikovega sulfida (H2S)

Pozitiven odziv opazimo s pojavom črnega oborine v celotnem mediju ali njegovem delu. Na splošno med poševno mejo in bazo.

Če se oborina pojavi v cevi, ne bo pokazala drugih reakcij, ki se pojavijo v mediju.

Zapis rezultatov

Pri interpretaciji testa se rezultati zabeležijo na naslednji način:

Najprej preberite poševno, nato dno ali taco, nato proizvodnjo H2S, in končno proizvodnjo plina.

Primer: K / A + (-). To pomeni:

  • K: Alkalni okvir (vijolična)
  • A: Kislo (rumeno) ozadje, to je negativna dekarboksilacijska reakcija in negativna deaminacija.
  • +: Proizvodnja vodikovega sulfida
  • (-): Brez plina.

Priprava

Natehtamo 35 g dehidriranega železa lizinskega agarja in raztopimo v enem litru destilirane vode.

Segrevajte, dokler se agar popolnoma ne raztopi, zato ga vrejte za eno minuto. Porazdelite 4 ml medija v 13/100 epruvete z bombažnim pokrovom.

Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut. Odstranite iz avtoklava in počakajte na nagnjen način, tako da je globoka podlaga in kratka konica..

Shranjujte v hladilniku 2-8 ° C. Pred zasejanjem bakterijskega seva pustite, da se strdi.

Barva dehidriranega medija je bež, medij pa rdečkasto vijolične barve.

Končni pH pripravljenega medija je 6,7 ± 0,2.

Medij se obarva rumeno s pH enakim ali manjšim od 5,2 in vijolično pri pH 6,5.

Uporabe

Ta test, skupaj z drugimi biokemičnimi testi, se uporablja za identifikacijo bacilov iz družine Enterobacteriaceae..

Medij se poseje s pravo vrvico ali iglo, na dno cevi se izvede eden ali dva udarca, nato pa se površina medija zigzagira.

Inkubiramo 24 ur pri 35-37 ° C v aerobiozi. Po potrebi se inkubira še 24 ur.

Predvsem je koristno razlikovati negativne vrste laktoze Citrobacter od Salmonellas sp.

Reference

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemični testi za identifikacijo klinično pomembnih bakterij. 3. izd. Uvodnik Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratoriji Britania. Lizinski železov agar. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  5. BD Laboratories Strmine agarja BBL lizinovega železa. 2007. Na voljo na: bd.com
  6. Laboratoriji Valtek Medium L.I.A. 2009. Na voljo na: andinamedica.com