Agar Hektoen temelj, priprava in uporaba



The Hektoen agar ali enterični Hektoen agar je trden, selektiven in diferencialen medij kulture. Na Inštitutu Hektoen so ga ustvarili King in Metzger za izolacijo enteropatogenih bakterij rodov Shigella in Salmonella..

Medij je sestavljen iz proteoznega peptona, kvasnega ekstrakta, žolčnih soli, laktoze, saharoze, salicina, natrijevega tiosulfata, natrijevega klorida, železovega citrata, amonijevega citrata, bromotimol modre, kisle fuksine in agarja. Ta formulacija omogoča razlikovanje rodov Shigella in Salmonella od preostalih bakterij, ki lahko rastejo v tem mediju..

Čeprav obstajajo še druga sredstva z enako funkcijo kot Hektoen agar, to pomeni večjo prednost v primerjavi z drugimi sredstvi, zlasti če želite obnoviti vrste Shigella..

Vrste obeh rodov povzročajo hude gastrointestinalne težave pri ljudeh zaradi uživanja kontaminirane hrane; zato je prenos fekalno - ustni. Zato je uporaba Hektoen agarja predvsem prikazana v mikrobiološki analizi vzorcev blata in hrane..

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
  • 3 Uporabite
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Omejitve
  • 6 Reference

Fundacija

Hektoen agar vsebuje peptone in izvleček kvasa kot vir hranil, ki zagotavljajo bistvene elemente za razvoj mikrobov.

Vendar pa ima tudi žolčne soli, ki delujejo tako, da zavirajo rast nekaterih bakterij, zlasti Gram pozitivne in nekatere Gram negativne. Zato se šteje za selektivni medij.

Po drugi strani je Hektoen agar diferencialni medij. To lastnost daje prisotnost fermentirajočih ogljikovih hidratov, kot so laktoza, saharora in salicin, skupaj s kazalnim sistemom pH, ki ga predstavljajo bromtimol modro in kislo fuksin..

Vse bakterije, ki lahko rastejo v tem mediju in ne pripadajo rodu Salmonella in Shigella, bodo razvile losos ali oranžne kolonije, razen rodu Proteus. Razlog za to je fermentacija enega ali več prisotnih ogljikovih hidratov, ki zakisli medij, kar povzroči obračanje indikatorja pH.

Po drugi strani rodi Shigella in Salmonella ne moreta fermentirati do nobenega od prisotnih ogljikovih hidratov, pri čemer uporabljajo samo peptonas kot vir energije, ki alkalizira okolje in zato so njegove kolonije modro-zelene..

Tudi v tem mediju je mogoče razlikovati bakterije, ki lahko tvorijo vodikov sulfid (brezbarven plin). Natrijev tiosulfat deluje kot vir žvepla, medtem ko je železov citrat odkrito sredstvo. Obe spojini omogočata nastanek črnega oborine železovega sulfida, ki dokazuje reakcijo.

Črna oborina v središču kolonije s prosojnim halojem daje videzu ribjega očesa. Ta značilnost kaže na prisotnost rodu Salmonella.

Nazadnje natrijev klorid ohranja osmotsko ravnotežje in agar daje trdni konsistenci mediju.

Priprava

Natehtamo 76 g dehidriranega medija in raztopimo v enem litru destilirane vode. Mešanico močno pretresite in jo pustite počivati ​​10 do 15 minut. Lahko se segreje in kuha, pri tem pa se rotira do popolnega raztapljanja. Ta medij ni avtoklaviran.

Ko medij doseže temperaturo približno 45 ° C, se v sterilne petrijevke neposredno vlije 20 ml volumna..

Agar se strdi. Takrat so pripravljeni za uporabo. Priporočljivo je, da jih takoj uporabite. Če niso možne, jih je treba hraniti v hladilniku, dokler se ne uporabijo.

Plošče je treba pred posajevanjem vzeti iz hladilnika pred sobno temperaturo.

PH medija mora biti 7,5 ± 0,2. Barva dehidriranega medija je vijolična in pripravljena je rjavkasto zelena.

Uporabite

Za iskanje bakterij iz rodu Shigella in Salmonelle v vzorcih blata in hrane priporočamo uporabo Hektoen agarja..

Možnost izolacije teh bakterij se močno poveča, če je bil vzorec predhodno obogaten s posebnimi bujoni, kot so juha selenita, selenitna cistinska brozga, tetrationatna juha itd..

Inokulum mora biti močan in sejanje opraviti z obarjanjem. Plošče se inkubirajo pri 37 ° C 24 do 48 ur pri aerobiozi.

Inkubacija je priporočljiva za 48 ur, ker so značilnosti kolonij jasnejše za njihovo interpretacijo in diferenciacijo v tem času.

Nadzor kakovosti

Za izvajanje kontrole kakovosti na tem mediju se uporabljajo certificirani bakterijski sevi, kot so: \ t Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 in Shigella sonnei ATCC 25931.

Pričakovani rezultati so naslednji: Salmonella typhimurium in. \ T  Salmonella enteritidis razviti morajo zeleno-modre kolonije s črnim središčem ali brez njega. Medtem ko bodo vrste Shigella rasle kot modro-zelene kolonije.

Lahko vključite tudi seve Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 in Staphylococcus aureus ATCC 25923.

V teh primerih so opazovane značilnosti naslednje: \ t E. coli in K. pneumoniae V tem mediju bodo razvili kolonije od lososa do oranžne barve, okoli njih bo oborina enake barve. Proteus bo razvil modro-zelene kolonije z ali brez črnega središča.

Medtem ko S. aureus in  E. faecalis včasih zavirati E. faecalis uspeva kot rumene kolonije, zelo majhna.

Po drugi strani, ker ta medij ni steriliziran v avtoklavu, je pomembno oceniti sterilnost medija. Zato je treba vsako pripravljeno serijo inkubirati eno do dve plošči brez inokulacije pri 37 ° C 24 ur pri aerobiozi..

Očitno je pričakovati, da na plošči ni rasti nobene vrste.

Omejitve

-Proteus vrste se lahko razvijejo v tem okolju in značilnosti njihovih kolonij se lahko zamenjajo s Salmonella ali Shigella vrstami. Zato mora biti vsaka sumljiva kolonija potrjena z biokemičnimi testi.

-Uporabo tega medija je treba spremljati z drugimi, manj selektivnimi agarji, ker se iskani mikroorganizem v majhnih koncentracijah ne more razviti v tem mediju..

-Med pripravo se ne pregrejte, saj prekomerna toplota spreminja sestavo medija.

-Neobičajne kolonije salmonele, ki fermentirajo laktozo, se lahko zdijo neopažene.

Reference

  1. Prispevki Wikipedije. Hektoen enterični agar. Wikipedija, svobodna enciklopedija. 13. marec 2019, 23:38 UTC. Na voljo na: .wikipedia.org / Dostopno 16. marca 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen enterični agar (HE Agar). 2013. Na voljo na: bd.com
  3. Laboratoriji Britania. Hektoen enterični agar. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratoriji. Agar Hektoen agar. Na voljo na: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen enterični agar. 2. izdaja. Na voljo na: bd.com/europe