Temelj, priprava in uporaba Agar Endo



The Endo agar ali medij Endo je trdni, diferencialni medij kulture z določeno stopnjo selektivnosti. Prvotno formulo je Endo izdelal leta 1904 za razlikovanje bakterij, ki fermentirajo laktozo, od nefermentirajočih bakterij. Na začetku je bil zasnovan za izolacijo Salmonella typhi, kasneje pa se je cilj medija obrnil k iskanju koliformnih bakterij.

Načelo Endo agarja se je ohranilo, vendar se je njegova formulacija skozi leta precej spremenila. Trenutno je medij sestavljen iz prebavljenega živalskega tkiva, laktoze, dikalijevega hidrogenfosfata, natrijevega sulfita, bazičnega fuksina in agarja..

Glavna raba medija je bila povezana z izolacijo in diferenciacijo gram negativnih bacilov, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae in drugim bližnjim družinam..

Dolgo časa so ga uporabljali pri odkrivanju koliformnih bakterij v vzorcih vode, mlečnih izdelkov in živil, danes pa je bila uporaba tega medija zamenjana z drugimi podobnimi funkcijami. Vendar pa nekateri mikrobiološki laboratoriji uporabljajo ta agar za izolacijo enterobakterij iz vzorcev kliničnega izvora..

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
    • 2.1 Endo agar
    • 2.2 Varianta agarja m-Endo
  • 3 Uporabite
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Omejitve
  • 6 Reference

Fundacija

Endo agar vsebuje peptone, ki so vir aminokislin, dušika, ogljika in energije, potrebnih za rast nezahtevnih mikroorganizmov..

Po drugi strani pa je rahlo selektivni značaj agarja zagotovljen z dodatkom natrijevega sulfita in bazičnega fuksina; obe komponenti delno ali v celoti zavirata razvoj večine Gram-pozitivnih bakterij.

Razlikovalni značaj je podan s prisotnostjo fermentabilnih ogljikovih hidratov, ki je v tem primeru laktoza in bazični fuksin, ki služi tudi kot indikator pH.

Gram-negativne bakterije, ki rastejo na tem agarju in lahko fermentirajo laktozo, bodo tvorile močne rožnate kolonije; patognomonično Escherichia coli nastajanje temno rdečih kolonij z zelenim kovinskim sijajem. To je posledica visoke proizvodnje kislin iz fermentacije ogljikovih hidratov.

Opozoriti je treba, da se medij, ki je okrog kolonij, spremeni v močno rožnato barvo. Medtem ko nefermentirajoči gram-negativni bacili laktoze tvorijo bledo rožnate kolonije, podobne srednje ali brezbarvni.

Dikalijev hidrogenfosfat uravnava pH medija in agar je komponenta, ki zagotavlja trdno konsistenco.

Priprava

Endo Agar

Natehtamo 41,5 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Mešanico segrejemo tako, da pogosto mešamo, dokler se medij popolnoma ne raztopi. Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C, pri tlaku 15 lb, 15 minut.

Ko se odstrani iz avtoklava, pusti, da se ohladi na temperaturo približno 45-50 ° C, pred mešanjem stresamo in homogeniziramo. Vlijte 20 ml v sterilne petrijevke.

Pustite, da se plošče strdi, obrnite in shranite v škatli ali ovijte s temnim papirjem, preden shranite v hladilnik. Zelo pomembno je zaščititi pripravljeni medij pred neposredno svetlobo. Priporočena praksa je pripraviti natančen znesek, ki bo potreben.

Če je shranjena v hladilniku, je treba plošče pred uporabo ohladiti.

PH medija mora biti med 7,2 in 7,6, barva pripravljenega medija pa je bledo roza..

Variant agar m-Endo

Obstaja še ena različica Enda agarja (m-Endo), ki sledi formuli McCarthy, Delaney in Grasso, ki vsebuje več spojin in se spreminja po načinu priprave..

Ta varianta vsebuje: laktozo, triptozo, encimsko razgradnjo kazeina, encimsko razgradnjo živalskega tkiva, natrijev klorid, kalijev fosfat, natrijev sulfit, kvasni ekstrakt, kalijev fosfat, bazični fuksin, natrijev deoksiholat, lauril sulfat natrija in agarja.

V tem primeru tehtamo 51 g dehidriranega medija in ga suspendiramo v 1 litru destilirane vode, ki vsebuje 20 ml etanola..

Med mešanjem se rahlo segrejemo, dokler se medij popolnoma ne raztopi. Ne segrevajte in ne sterilizirajte v avtoklavu. Ko je mešanica homogena, jo poslužite v sterilnih petrijevih posodah in pustite, da se strdi.

Uporabite

V nekaterih državah se še vedno uporablja za štetje celotnih in fekalnih koliformnih bakterij v vzorcih vode in hrane, zlasti prisotnost Escherichia coli kot glavni kazalnik fekalne kontaminacije.

M-Endo agar priporoča Ameriško združenje za javno zdravje (APHA) za spremljanje in nadzor programov za razkuževanje in čiščenje odpadnih voda ter za ocenjevanje kakovosti pitne vode..

Najpogosteje uporabljena metoda je membranska filtracija po obogatitvi vzorca z lavril sulfatno juho za 2 do 4 ure..

Lahko se uporablja tudi kot nadomestek za EMB agar v mikrobiološki analizi hrane in vode po najbolj verjetni številčni tehniki (NMP), zlasti v popolni potrditveni fazi za potrditev prisotnosti E. coli iz umazanih bujonov ES.

Nadzor kakovosti

Za vrednotenje kakovosti pripravljenega šarže Endo agarja se zasejejo znani ali potrjeni kontrolni sevi.

Med sevi, ki se lahko uporabljajo za ta namen, so: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 in Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Sevi so posejani z izčrpanjem in 24 ur inkubirani pri aerobiozi pri 37 ° C.

Pričakovani rezultati so:

  • Za Escherichia coli: kolonije močno rdeče, s kovinskim sijajem.
  • Za E. cloacae in K. pneumoniae kolonije morajo biti rožnate sluznice.
  • V primeru S. typhimurium, S. flexneri in P. mirabilis kolonije so ponavadi bledo rožnate ali brezbarvne.
  • Končno, E. faecalis pričakuje se, da bo delno zavrto, zato mora biti njegova rast slaba z zelo majhnimi kolonijami močne rožnate barve.

Omejitve

-Sredstvo Endo ima nizko selektivno moč, zato je možno, da se lahko razvijejo nekateri Gram pozitivni mikroorganizmi, kot sta Staphylococcus, Enterococcus in celo kvasovke..

-V tem mediju se lahko razvijejo drugi bacili, ki niso del družine Enterobacteriaceae, kot na primer Pseudomonas sp in Aeromonas sp. Značilnosti teh sevov so brezbarvne nepravilne kolonije.

-Pripravljen medij je zelo občutljiv na svetlobo, zato podaljšana izpostavljenost temu poslabša sistem indikatorjev, kar nepopravljivo poškoduje medij..

-Sestavine gojišča se štejejo za rakotvorne, zato se je treba izogibati neposrednemu stiku.

-Dehidrirani medij je zelo higroskopičen in ga je treba hraniti v originalni embalaži pri sobni temperaturi, tesno zaprto in v suhem okolju..

Reference

  1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Na voljo na: bd.com
  2. Laboratoriji Neogen M Endo Agar. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedija, Prosta enciklopedija. 7. sept. 2017, 08:27 UTC. 28. februar 2019, 22:55. Na voljo v: en.wikipedia.
  4. Laboratorij MercK. Endo agar 2019. Na voljo na: merckmillipore.com
  5. Tehnični list laboratorijev. M -Endo Agar LES. 2015. Na voljo na: liofilchem.net