Agar EMB temelj, priprava in uporaba



The EMB agar je selektivno in diferencialno trdno gojišče, ki se uporablja za izolacijo gram negativnih bacilov, predvsem iz družine Enterobacteriaceae, in drugih nezahtevnih gram negativnih bacilov. Znana je tudi pod kratico EAM, kar pomeni eozin-metilen modro.

Ta medij sta ustvarila Holt-Harris in Teague leta 1916. Vsebuje pepton, laktozo, saharozo, dikalijev fosfat, agar, eozin, metilen modro in vodo. Zelo je podoben agarju MacConkey, zlasti če uporabljamo agar EMB, modificiran z Levinom, ki ne vsebuje saharoze..

Pravzaprav se vsak laboratorij odloči, če deluje z enim ali drugim, ker izpolnjujejo isto funkcijo, čeprav so biokemično različni..

Predstavlja celo enako pomanjkljivost kot klasičen agar MacConkey v smislu rojevanja pri rodu Proteus. Da bi se izognili temu pojavu, lahko povečate koncentracijo agarja do 5%..

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Selektivno
    • 1.2 Diferenca
  • 2 Priprava
  • 3 Uporabe
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Končne ugotovitve
  • 6 Reference

Fundacija

Selektivno

EMB agar je subtilno selektiven, ker vsebuje anilinske barve (eozin in metilen modro), ki delujejo kot inhibitorji, preprečujejo rast večine Gram-pozitivnih bakterij in nekaj zahtevnih gram-negativnih bacilov..

Vendar pa ima ta agar pomanjkljivost, da lahko nekatere Gram-pozitivne bakterije upirajo prisotnosti inhibitornih snovi in ​​rastejo kot majhne brezbarvne točkovne kolonije, kot so Enterococcus faecalis in nekaj Staphylococcus.

Lahko tudi gojite določene kvasovke, kot npr Kompleks Candida albicans, To bo dalo zelo majhne rožnate kolonije. Tudi klamidospore se lahko razvijejo iz tega kvasa, če je vzorec posejan z globino.

Diferencial

Po drugi strani je EMB agar tudi diferencialno sredstvo, ker imajo ta barvila skupaj (eozin in metilensko modro) lastnost, da tvorijo oborino pri kislem pH, zato služijo kot indikatorji njihove proizvodnje..

Zato šibko fermentirajoče bakterije laktoze ali saharoze proizvajajo vijolične kolonije v 24 do 48 urah. Na primer rodovi Klebsiella, Enterobacter in Serratia.

Bakterije, ki močno fermentirajo laktozo, kot npr Escherichia coli, ali saharoze, kot Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, tvorijo zelenkasto-črno oborino, ki pri teh vrstah daje značilen kovinski sijaj.

Treba je opozoriti, da če se uporablja EMB levinski medij (brez saharoze), Yersinia enterocolitica in Proteus penneri proizvajali bodo pregledne kolonije.

Bakterije, ki ne fermentirajo laktoze ali saharoze, se hranijo s prisotnostjo peptonov, ki zagotavljajo aminokisline in dušik, potrebne za razvoj bakterij, in proizvajajo pregledne kolonije. Na primer, rodovi Salmonella in Shigella med drugim.

Prav tako je pomembno omeniti, da lahko rod Acinetobacter predstavlja kolonije sivkasto modre barve, čeprav ni fermentor laktoze, niti saharoze, vendar imajo lastnost, da fiksirajo metilensko modro v svoji celični steni. To se lahko zgodi tudi pri drugih oksidativnih bakterijah.

Priprava

Prvotni dehidrirani medij je svetlo bež.

Za pripravo tega gojišča kulture je treba stehtati in suspendirati 36 gramov dehidriranega medija v viali, ki vsebuje en liter destilirane vode..

Po 5 minutnem mirovanju mešanice spravite fiolo v vir toplote, mešajte jo močno in stalno, dokler ne zavre in se popolnoma raztopi..

Nato je treba raztopljeno gojišče kulture sterilizirati z avtoklavom pri 121 ° C 15 minut.

Na koncu časa odstranimo iz avtoklava in ga pustimo na kratko počivati. Nato jo vročite (45 - 50 ° C) med 15 do 20 ml agarja v vsaki sterilni petrijevki. Medij mora biti modri lakmus.

Po serviranju plošče pustimo rahlo odkriti, dokler se agar malo ne ohladi. Nato se pokrijejo in pustijo, da se popolnoma strdi. Kasneje se naročijo v obrnjenem nosilcu plakov in shranijo v hladilniku (8 ° C), dokler se ne uporabijo.

Ta postopek je prednostno izveden v pokrovu laminarnega toka ali pred Bunsenovim gorilnikom, da se prepreči kontaminacija.

Pomembno je vedeti, da bo vsaka komercialna hiša pokazala količino, ki jo je treba stehtati, da se pripravi gojišče.

Končni pH medija mora biti 7,2 ± 0,2

Uporabe

Ta medij se uporablja za sejanje urina in iztrebkov ali kakršnih koli kliničnih vzorcev, zlasti če obstaja sum na prisotnost nezahtevnih gram-negativnih bacilov, kot so bacili iz družine Enterobacteriaceae, ki zelo dobro raste v tem mediju..

Enteropatogene bakterije rodov Shigella in Salmonella se odlikujejo po svojih brezbarvnih ali rahlo jantarnih kolonijah..

Poleg tega rastejo tudi drugi nefermentacijski laktozni bacili, kot so Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Prav tako je ta medij zelo uporaben pri mikrobiološki analizi hrane in vode, saj je idealen za popolno potrditveno fazo določanja koliformnih bakterij, to je za potrditev prisotnosti E. coli iz skromnih brozg EC, iz najbolj verjetne številčne tehnike (NMP).

Nadzor kakovosti

Da bi preverili, ali na novo kultivirano gojišče dobro deluje, lahko kontrolne seve posadimo, da opazujemo značilnosti kolonij in preverimo, ali dajejo, kot je pričakovano.

Za to so sevi ATCC ali dobro identificirani sevi. \ T E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa in nekaj gram-pozitivnih bakterij, kot je npr S. aureus.

Pričakuje se, da E. coli Ustvari dobro razvite modrikasto-črne kolonije z zelenim kovinskim sijajem. Dokler, Enterobacter aerogenes in Klebsiella sp dati morajo dobro razvite kolonije sluznice modrikasto-črne barve.

Za svoj del, Salmonella typhimurium in Shigella flexneri, razviti morajo velike kolonije, brezbarvne ali rahlo jantarne barve.

Končno žanr Pseudomonas aeruginosa raste kot brezbarvne kolonije nepravilnih velikosti, medtem ko morajo biti Gram-pozitivne bakterije popolnoma omejene ali zmerno rastejo z zelo majhnimi kolonijami.

Končne ugotovitve

Včasih sterilizacija povzroči, da se metilen modro zmanjša in opazuje oranžni medij. Da bi se metilen modro oksidiralo in da se vijolična barva obnovi, jo je treba nežno premešati, dokler se barva ne povrne.

Tudi po sterilizaciji lahko obarvamo barvo, zato jo moramo dobro premešati, preden serviramo petrijevke.

Reference

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B in Velázquez O. 2009. Tehnike za mikrobiološko analizo živil. 2nd ed. Fakulteta za kemijo, UNAM. Mehika.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterizacija in porazdelitev sevov Escherichia coli Potencialni patogeni izolati piščančjih brojlerjev s perutninskih farm v Peruju. Rev. veterinar. Peru 2012 23 (2): 209-219. Na voljo na: scielo.org.
  3. Laboratoriji Conda S.A. Eozinski agar in metilensko modro. 2010. Na voljo na: condalab.com
  4. Laboratoriji Britania. Levine E.M.B (z eozinom in metilen modro) 2011. Na voljo na: britanialab.com
  5. BD Laboratories Agar BD EMB (modri agar Eosin metilen), modificiran. 2013. Na voljo na: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik