Agar CLED fundacija, uporaba in priprava



The CLED agar (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) je diferencialno trdno gojišče, ki se uporablja za diagnosticiranje okužb sečil. Sestava gojišča je zasnovana za dobro rast urinskih patogenov in je idealna za kvantifikacijo enot, ki tvorijo kolonije (CFU)..

Medij kulture CLED je neselektiven, ker lahko v njem rastejo Gram-negativni in tudi Gram-pozitivni mikroorganizmi. Toda to ni problem, saj je večina okužb sečil povzroča ena vrsta mikroorganizmov.

V primeru polimikrobnih okužb je mogoče dobiti 2 ali 3 različne bakterije, vendar je zelo redka in večino časa je kontaminirana..

Med gram-negativnimi bakterijami, ki lahko rastejo v tem mediju, so bacili, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae in drugih enteričnih bacilov, pri čemer so uropatogeni najpogosteje izolirani v vzorcih urina, in sicer: \ t Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, med drugim.

Prav tako so med Gram-pozitivnimi bakterijami, ki lahko rastejo v tem mediju Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp in lahko celo gojijo kvas, kot kompleks Candida albicans.

Vendar pa zaradi kemične sestave medija ne dopušča rasti nekaterih zahtevnih genitourinarnih patogenov, kot je Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, med drugim.

Indeks

  • 1 Podlaga CLED agarja
  • 2 Temelj CLED agarja (Bevis)
  • 3 Uporabe
    • 3.1 Setev vzorcev urina
    • 3.2 Razlaga
    • 3.3 Identifikacija
  • 4 Priprava
  • 5 Reference

Podlaga CLED agarja

Medij kulture CLED ima kot vir energije mesni ekstrakt, hidrolizat kazein pankreasa in želatinski hidrolizat. Zagotavljajo hranila za razvoj nezahtevnih bakterij.

Vsebuje tudi cistin, aminokislino, ki omogoča rast koliformnih bakterij, ki se razlikujejo po svoji majhnosti.

Tudi laktoza vsebuje fermentirne ogljikove hidrate, zato je ta medij diferencialen; da lahko razlikujejo fermentacijske bakterije od nefermentirajoče laktoze.

Fermentacije bakterije obrniti, da pH kislega proizvodnje za razvoj rumene kolonije, medtem ko ne kvasovke ne ustvarjajo spremembe v okolju, kar ob barvo prvotne agar, zelena.

Fermentacijska reakcija je razkrita zaradi prisotnosti indikatorja pH, ki je v tem mediju bromotimol modro.

Po drugi strani pa nizka koncentracija elektrolitov v mediju zavira značilno invazivno rast rodu Proteus, imenovan učinek rojevanja. To ustvarja prednost v primerjavi z drugimi sredstvi, saj omogoča štetje UFC, tudi če je prisoten rod Proteus.

Vendar nizka koncentracija elektrolitov zavira rast nekaterih vrst iz rodu Shigella, v nasprotnem primeru v primerjavi z drugimi sredstvi.

Osnova CLED agarja (Bevis)

Obstaja varianta ali modifikacija tega medija, ki ga je izdelal Bevis, ki je v prvotno sestavo vključil prvotno sestavo fuksinske kisline (Andradejev indikator). Deluje skupaj z bromotimol modro za razlikovanje fermentacije od nefermentirajočih bakterij.

Razlika med konvencionalne metode in spremenjeno barvo sprejema kolonije. Pri laktoze fermentaciji bakterije, kolonij razvije rdečkasto oranžne barve, rožnate ali rdeče halo, medtem nonfermenters so modrikasto-siva.

Uporabe

CLED agar se uporablja izključno za setev vzorcev urina. Uporaba tega medija je še posebej pogosta v evropskih laboratorijih, v Ameriki pa se manj uporablja.

Zbiranje vzorca mora izpolnjevati določene parametre za pridobitev zanesljivih rezultatov, vključno z:

  • Ne vzemite antibiotikov, preden vzamete vzorec.
  • Po možnosti jemljite urin od prve ure zjutraj, ker je bolj koncentriran, kadar ni mogoče odvzeti vzorcev z invazivnimi metodami..
  • Preden vzamete vzorec, temeljito operite genitalije.
  • Zavrzite prvi tok uriniranja in nato posodo.
  • V sterilne označene posode zberemo med 25 in 30 ml urina.
  • Takoj odnesite v laboratorij, obdan z ledom.
  • Pred uporabo je treba pred dvema urama emisije obdelati ali ohladiti pri 4 ° C največ 24 ur.

Sejanje vzorcev urina

Vzorec urina je treba razredčiti 1:50.

Za redčenje postavite 0,5 ml urina bolnika in ga razredčite s 24,5 ml sterilne fiziološke raztopine.

Izmerite 0,1 ml razredčenega urina in sejate na površino z drigalsko lopatico na CLED mediju. To je metoda sejanja, navedena za štetje kolonij. Zato se uporablja v vzorcih urina, saj morajo biti rezultati izraženi v CFU / ml.

Za kvantifikacijo teh kolonij, po naslednjem postopku: štetje kolonij in pomnožimo s ploščo 10 in 50. Ta pridobi število cfu / ml urina.

Razlaga

Štetje nad 100.000 CFU / ml

Štetje pod 1000 CFU / ml - Ni okužbe

Štetje med 1000-10,000 CFU / ml -Dubertabilnost, možna kontaminacija, ponovitev odvzema vzorcev.

Identifikacija

Kolonije, gojene na CLED agarju, bi morale biti Gram in odvisno od morfotipskih značilnosti mikroorganizma se izvaja določena subkultura..

Na primer, če gre za gram negativno bacillus, bo posejan na MacConkey agar, kjer je fermentacija ali ne laktoze potrjena. Poleg tega je za izvedbo oksidaznega testa pritrjen hranilni agar.

Če Gram pokaže Gram pozitivne koke, ga lahko subkulturiramo v slanem manitolnem agarju in hranilnem agarju. V slednjem se izvede test katalaze. Končno, če opazimo kvasovke, se bo posejala na Sabouraud agar.

Mnogi laboratoriji preprečujejo uporabo CLED medija in raje uporabljajo le krvni agar, MacConkey in hranilni agar za setev vzorcev urina..

Priprava

V viali z enim litrom destilirane vode raztopite 36,2 g praškastega agarja. Po 5 minutah mirovanja se resuspendirani agar segreje, neprestano mešanje do vrenja 1 minuto.

Nato sterilizirajte pri 121 ° C 15 minut v avtoklavu. Ko se čas konča, ga odstranimo iz avtoklava in pustimo, da se ohladi, dokler ne doseže temperature 45 ° C. Nato jih jemljemo med 15 - 20 ml v vsako sterilno petrijevko.

Postopek za serviranje plošč mora biti izveden v pokrovu laminarnega toka ali pred Bunsenovim gorilnikom, da se prepreči kontaminacija..

Plošče, na katere se nanaša, se lahko strdijo, naročijo v držalu za ploščo, obrnjeno in shranijo v hladilniku (2-8 ° C) do uporabe.

Končni pH pripravljenega medija mora biti 7,3 ± 0,2.

Reference

  1. Priporočila za mikrobiološko diagnostiko okužbe sečil. chil infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Na voljo na: scielo.org.
  2. Panchi J. Identifikacija mikrobnega sredstva, ki povzroča okužbe urina pri notranjih bolnikih, pri katerih poteka kateterizacija mehurja. 2016. Dodiplomski študij za pridobitev naziva Licenca v kliničnem laboratoriju. Tehnična univerza Ambato. Ekvador.
  3. Laboratoriji Britania. Pol CLED. Na voljo na: britanialab.com.
  4. Laboratoriji Renylab Navodila za uporabo, CLED Agar. 2013 Na voljo na: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Osnovni priročnik za mikrobiologijo. Na voljo na: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Možnost CLED agar v urinski kulturi. Prospektivna in primerjalna ocena. Diagnostična Microbiol Infekcija Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinična mikrobiologija. Univerza v Cadizu, 2. izdaja. Služba za publikacije UCA.