Simmonsov citratni agar temelj, priprava in uporaba



The Simmons citratni agar Je trden medij, ki se uporablja kot biokemični test za identifikacijo mikroorganizmov, zlasti gram-negativnih bacilov. Prvotni medij je ustvarila Koser leta 1923.

Koserjev citratni medij je sestavljen iz juhe, ki vsebuje natrijev fosfat, amonijev fosfat, monokalijev fosfat, magnezijev sulfat in natrijev citrat..

Kot lahko vidimo, je edini vir ogljika v mediju citrat, dušik pa amonijev fosfat, beljakovine in ogljikovi hidrati, ki so izpuščeni kot vir teh elementov, pogosto so prisotni v drugih medijih..

Zato se bakterija, inokulirana v tem mediju, lahko razmnožuje le, če je sposobna vzeti citratni ogljik. Test je bil pozitiven, če je v mediju prišlo do motnosti, vendar je imel pomanjkljivost, da se lahko pojavi nespecifična motnost.

To težavo je rešil Simmons, ki je agerju in bromotimol modri barvi dodal Koserjevo originalno formulo. Čeprav je načelo enako, se razlaga drugače.

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Način sejanja
    • 1.2 Razlaga
  • 2 Priprava
  • 3 Uporabite
  • 4 Končne ugotovitve
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 Seed
    • 4.3 Intenzivnost barve
  • 5 Reference

Fundacija

Nekatere bakterije imajo sposobnost preživetja brez fermentacije ali proizvodnje mlečne kisline, ki potrebujejo energijo z uporabo drugih substratov. V tem testu je edini vir ogljika ponujen citrat.

Bakterije, ki so sposobne preživeti v teh pogojih, hitro presnavljajo citrat z alternativo tradicionalni poti z uporabo cikla trikarboksilne kisline ali cikla fermentacije citrata..

Katabolizem citrata z bakterijami obsega encimski mehanizem brez posredovanja koencima A. Ta encim je znan kot citronaza (citratna oksaloacetat-liaza) ali citratna desmolaza. Za reakcijo je potrebna prisotnost bivalentnega kationa, ki ga v tem primeru dobavlja magnezij.

Reakcija generira oksaloacetat in piruvat, ki nato povzročata nastanek organskih kislin na sredini alkalnega pH, ki nastane z uporabo vira dušika. Te organske kisline se uporabljajo kot vir ogljika, ki proizvaja karbonate in bikarbonate, kar še dodatno alkalizira medij.

Način sejanja

Citim medij Simmons je treba z ravno cevko ali iglo inokulirati v ribji rep in inkubirati 24 ur pri 35-37 ° C. Na koncu časa opazimo rezultate.

Sejanje poteka samo na površini agarja. Ne udarjajte.

Razlaga

Če je medij prvotne barve (zelene barve) in ni vidne rasti, je test negativen, če pa se medij spremeni v modro, to pomeni prisotnost alkalnih produktov, ki jih zazna indikator pH. V tem primeru je test pozitiven.

To se zgodi zato, ker, če bakterija uporablja ogljik citrata, je tudi sposobna vzeti dušik iz amonijevega fosfata, s katerim sprosti amoniak in alkalizirati medij..

Po drugi strani pa, če rast bakterije opazimo v gojišču, vendar se barva ne spremeni, je treba preizkus prav tako obravnavati kot pozitiven, saj, če je rast, pomeni, da je bakterija lahko uporabila citrat kot vir ogljika, čeprav trenutno ni spremembe pH (včasih lahko traja).

Če obstaja dvom o razlagi končne barve, jo lahko primerjamo s cevko neinokuliranega citrata.

Priprava

Za en liter vode odtehtamo 24,2 g dehidriranega medija. Zmešamo in pustimo stati približno 5 minut. Končajte raztapljanje medija s segrevanjem 1 ali 2 minut in pogosto mešajte.

V epruvete služimo 4 ml in 15 minut avtoklaviramo pri 121 ° C. Ko zapuščate avtoklav, ga nagnite s pomočjo podlage tako, da se agar strdi v obliki vrha piščali z majhnim čepom ali spodnjim delom in več stožcev..

Končni pH citratnega medija je 6,9 ​​(zeleno). Ta medij je zelo občutljiv na spremembo pH.

Pri pH 6 ali nižji medij postane rumene barve. Ta barva se pri testu ne opazi z bakterijami.

Pri pH 7,6 ali več se medij spremeni v intenzivno prusko modro.

Uporabite

Citramski agar Simmons se uporablja za identifikacijo določenih mikroorganizmov, zlasti bacilov, ki spadajo v družino Enterobacteriaceae, in drugih bacilov, ki ne fermentirajo glukoze..

Končne ugotovitve

Simmonsov citratni medij je zelo občutljiv test, saj se lahko dobijo lažno pozitivni rezultati, če pride do določenih napak.

Paziti je treba na naslednje:

Inokulum

Ne ustvarjajte zelo debelega ali obremenjenega bakterijskega inokuluma, ker lahko povzroči nastanek bakreno rumene barve na mestu sajenja, ne da bi to vplivalo na preostali medij, lahko pa vodi k prepričanju, da je rast. Enako ne pomeni pozitivnosti testa.

Podobno lahko debel inokulum povzroči lažno pozitivno, saj lahko predoblikovane organske spojine v celičnih stenah umirajočih bakterij sproščajo dovolj ogljika in dušika, da spremenijo indikator pH..

Zato je idealno, če namesto platinske ročice uporabite iglo, da se izognete odvečni snovi.

Poseljeno

Po drugi strani pa je, ko je posajena baterija biokemičnih testov za identifikacijo zadevnega mikroorganizma, pomembno, da je test citrata prvi inokuliran, da se prepreči vlečenje beljakovin ali ogljikovih hidratov iz drugega medija..

V teh okoliščinah je mogoče pridobiti lažno pozitivno, saj se vsaka od teh snovi, ki se vnesejo po pomoti, presnovi in ​​povzroči spremembo pH.

Drug način, da se izognemo vleku snovi, je, da dobro zapečemo ročaj in vzamemo nov inokulum med enim testom in drugim.

Paziti je treba tudi na dotik kolonije, da se opravi inokulum, saj se je treba izogibati vleku dela agarja iz kulture, iz katere pridejo bakterije, zaradi prej opisanega..

V tem smislu Matsen, Sherris in Branson priporočajo redčenje inokuluma v fiziološki raztopini pred inokulacijo citratnega testa, da se prepreči prenos drugih virov ogljika..

Intenzivnost barve

Upoštevati je treba, da se intenzivnost barve, ki nastane pri pozitivnem testu, lahko razlikuje glede na komercialno hišo.

Poleg tega obstajajo mikroorganizmi, ki so pozitivni v 24 urah, vendar obstajajo tudi drugi sevi, ki potrebujejo 48 ur ali več, da povzročijo spremembo pH..

Reference

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemični testi za identifikacijo klinično pomembnih bakterij. 3. izd. Uvodnik Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slain. 2015. Na voljo na: bd.com
  5. Laboratoriji Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  6. Diagnostični laboratoriji Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016. Na voljo na: andinamedica.com.