Temelj, uporaba in priprava čokolade na agar



The čokoladni agar je trden, obogaten, neselektiven in nediferenciran medij kulture. Uporablja se predvsem za izolacijo mikroorganizmov, ki zahtevajo s prehranskega vidika, čeprav lahko rastejo vse vrste bakterij.

Zato se njegova uporabnost povečuje predvsem pri sejanju vzorcev, ki so normalno sterilni, kot je CSF in sklepna tekočina. Čeprav je vključen tudi v sredstva, izbrana za setev polimikrobnih vzorcev, je v teh primerih treba dodati antibiotike, ki zavirajo spremljajočo floro..

Ta medij ima značilno rjavo barvo, ki je zelo podobna čokoladi, od tod tudi njeno ime. Pripravek je zelo podoben krvnemu agarju, samo v tem primeru je treba ogreti kri, da se rdeče krvne celice zlomijo.

Njegova priprava, tako kot krvni agar, je zelo občutljiva, saj je zlahka kontaminirana. Zaradi tega mnogi laboratoriji raje pridobivajo ta medij, ki ga že pripravljajo komercialne hiše, ki zagotavljajo njihovo kakovost.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Uporaba
    • 2.1 Čokoladni agar, pripravljen z Columbia agarjem
    • 2.2 Čokoladni agar, pripravljen z bazičnim agarjem GC (za gonokoke)
    • 2.3 Čokoladni agar, pripravljen z agarjem Müeller Hinton
    • 2.4 Čokoladni agar, pripravljen s Thayer Martin agarjem
  • 3 Priprava
    • 3.1 Izračuni
    • 3.2 Stehtajte in raztopite
    • 3.3 Sterilizirajte
    • 3.4 Združevanje krvi
    • 3.5 Drugi način za pripravo čokoladnega agarja brez uporabe krvi
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Reference

Fundacija

Ta medij je sestavljen iz baze agarja, bogatega s hranili in ogrevano kri. Hemoliza rdečih krvnih celic zagotavlja faktor X (hemin) in faktor V (NAD), ki sta potrebna za rast nekaterih mikroorganizmov, kot je rod. Haemophilus. Prav tako je zelo koristen za izolacijo Neisserias sp.

Kot krvni agar se lahko kot osnovni agar uporabljajo tudi različni mediji, odvisno od potrebe. Med uporabljenimi mediji so infuzija možganskega srca in sojin agar tripticaza, čeprav so najbolj priporočeni agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar in Thayer Martin agar..

Nekatere variante čokoladnega agarja vključujejo komercialno dostopen obogaten dodatek, imenovan Isovitalex ali Polivitex.

Ti dodatki vsebujejo vitamin B12, L-glutamin, adenin, gvanin hidroklorid, p-aminobenzojska kislina, nikotinamid adenin dinukleotid (NAD), tiamin pirofosfat, železov nitrat, tiamin hidroklorid, cistein hidroklorid, L-cistin in glukoza.

Pomembno je omeniti, da je čokoladni agar bolj obogaten kot krvni agar, vendar ne omogoča opazovanja vzorcev hemolize..

Uporabe

Čokoladni agar, pripravljen z Columbia agarjem

Ta medij vsebuje prebavljen iz kazeina in trebušnega slinavke, prebavljen mesni peptid, natrijev klorid, agar, ekstrakt kvasa in koruzni škrob. Prav tako je bogat z vitamini, minerali in esencialnimi aminokislinami.

Ta baza z ogrevano kri je idealna za izolacijo bakterij iz rodu Neisseria. Po drugi strani, če dodatek za Brucello dodamo mediju, lahko omenjeni mikroorganizem izoliramo. Rezultati so izboljšani z uporabo konjske krvi.

Čokoladni agar, pripravljen z GC baznim agarjem (za gonokoke)

Ta medij vsebuje peptone, koruzni škrob, monobazni in dibazični pufer, natrijev klorid in agar.

Večina komercialno pripravljenih čokoladnih agar predstavitev prihaja s to bazo in ne vsebuje ogrevane krvi, temveč sintetično mešanico hemina in kemičnega dodatka rastnih faktorjev, vitaminov, mineralov, aminokislin, faktorja V in glukoze..

Čokoladni agar, pripravljen z agarjem Müeller Hinton

Uporablja se za izvajanje testa občutljivosti na protimikrobne mikroorganizme, kot je npr Streptococcus pneumoniae s 5% ogrevano krvjo.

Uporablja se tudi za primarno izolacijo Neisserias in Haemophilus, vendar v posebnem primeru izolacije Haemophilus uporaba konjske krvi je prednostna, saj je bogat vir faktorjev X in V.

Po drugi strani, če vzorec, ki ga je treba posejati, prihaja iz nesterilnega območja, je priporočljivo, da dodatek antibiotikov zavre normalno floro območja..

Primer za vzorce dihanja, kjer obstaja sum na prisotnost bakterij iz rodu Haemophilus Bacitracin se uporablja za zaviranje rasti Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus in Saprofitni Neisseria.

V primeru vzorcev genitalnega kancarja, kjer obstaja sum Haemophilus ducreyi, Čokoladni agar, pripravljen na naslednji način, je bil uspešno uporabljen: Müeller-Hinton agar s 5% čokoladne konjske krvi, 1% obogatitev Isovitalexa in 3 μg / ml vankomicina.

Čokoladni agar, pripravljen s Thayer Martin agarjem

Ta medij je poseben za izolacijo Neisseria gonorrhoeae. Vsebovati mora antibiotike za zaviranje spremljevalne flore. Uporablja se jagnječa kri.

Priprava

Opaziti je treba indikacije za pripravo osnovnega agarja, ki ga je treba uporabiti. So na hrbtni strani embalaže dehidriranega medija. Običajno opisujejo, koliko je treba tehtati za pripravo enega litra gojišča.

V laboratoriju lahko pripravite natančno potrebno količino, ki je lahko večja ali manjša od enega litra.

Izračuni

Za izračun količine, ki jo je treba stehtati za pripravo želenega volumna, je določeno pravilo tri. Primer:

Če je za 1 liter potrebno tehtati 40 g in laboratorij potrebuje 800 ml, se pravi:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formula bo naslednja:

X = 32 gr (za tehtanje 800 ml).

Stehtajte in raztopite

Nadaljujemo s tehtanjem potrebne količine in jo postavimo v fiolo z vodo.

Segrejte do zmerne toplote in rahlo zmešajte z rotacijskimi gibi, dokler se dehidrirani medij popolnoma ne raztopi in pustimo, da vre 1 minuto..

Steriliziraj

Fiolo uvedemo v avtoklav, da steriliziramo medij pri 121 ° C 20 minut.

Agregat krvi

Ko zapustimo avtoklav, ga pustimo počivati, dokler temperatura medija ne znaša približno med 56 in 70 ° C, da se prelije in premeša, dokler se medij ne obarva rjavo..

Če želite dodati dodatke, je to čas, da to storite. Nato zmešamo in damo v vsako sterilno petrijevko 20 ml.

Celoten postopek je treba izvesti v laminarnem pokrovu ali okrog Bunsenovega gorilnika.

Pustite stati, dokler se ne strdi in obrnite v hladilniku.

Drug način za pripravo čokoladnega agarja brez uporabe krvi

Osnovni medij pripravimo, kot je opisano zgoraj, komercialno pridobljen dehidrirani hemoglobin raztopimo in steriliziramo v avtoklavu..

Obe raztopini pustimo, da se ohladita na 50 ° C, združimo in dodamo dodatek. Zmešajte v aseptičnih pogojih in nato postrezite v sterilne petrijevke.

Nadzor kakovosti

Pomembno je, da je kri postavljena na označeno temperaturo, ker je idealna za liziranje rdečih krvnih celic in hkrati za vzdrževanje faktorja V, ki je termosenzibilen..

Na površini agarja ne sme biti mehurčkov. Vsako serijo 100 plošč je treba inkubirati eno ali dve plošči v peči pri 37 ° C za 24 ur, da se preveri njegova sterilnost..

Za najboljše rezultate je treba čokoladni agar uporabiti kmalu po pripravi.

Kontrolne bakterijske seve je treba vzeti v laboratoriju, da se oceni učinkovitost sveže pripravljenega gojišča za rast glavnih zahtevnih mikroorganizmov kliničnega pomena..

Reference

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinična mikrobiologija. Univerza v Cadizu, 2. izdaja. Služba za publikacije UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Panamericana S.A Uvodnik.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Izvedljivost uporabe osnovnega gojišča kulture GC-Biocen Agar v laboratoriju za mikrobiologijo. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Na voljo na: scielo.sld.
  5. Prispevki Wikipedije. Čokoladni agar. Wikipedija, svobodna enciklopedija. 17. december 2018, 19:54 UTC. Na voljo na: en.wikipedia.org.