Agar BHI temelj, priprava in uporaba



The BHI agar ali agar z Brain Heart Infusion je hranljivo trdno gojišče. V španščini ga imenujemo agar za infuzijo možganskega srca. Gre za neselektivno gojišče za kulturo, kar pomeni, da se lahko razvijejo vse vrste Gram pozitivnih in Gram negativnih bakterij, kot tudi nekatere kvasovke in filamentozne glive..

Sestavljen je iz telečje možganske in srčne infuzije, peptičnega hidrolizata živalskih tkiv, hidrolizata kazeina trebušne slinavke, natrijevega klorida, glukoze, dinatrijevega fosfata in agarja..

Opozoriti je treba, da je BHI agar eden najpogostejših medijev kulture v bakterioloških laboratorijih. Lahko se uporablja brez dodatkov kot primarna kultura, subkultura kolonij, pridobljenih v drugih selektivnih medijih, ali za vzdrževanje sevov v laboratoriju..

Po drugi strani pa je idealen medij, ki ga lahko uporabimo kot bazo pri pripravi obogatenih medijev, kot so krvni agar in čokoladni agar. Oba sta idealna za izolacijo zahtevnih mikroorganizmov s prehranskega vidika. Vendar je treba upoštevati, da zato, ker vsebuje glukozo, ni primerno opazovati vzorcev hemolize.

Podobno se BHI agar lahko uporablja za pripravo posebnih sredstev za izolacijo patogenih mikroorganizmov težke rasti v skupnih medijih, med njimi: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae in Histoplasma capsulatum.

Z dodatkom antibiotika BHI agar postane selektivni medij za izolacijo gliv.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
    • 2.1 Klini
    • 2.2 Plošče
    • 2.3 Priprava krvnega agarja
  • 3 Uporabe
    • 3.1 Uporaba brez dodatkov
    • 3.2 Kot osnovni agar za pripravo drugih medijev
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Reference

Fundacija

Je hranilni kulturni medij za izolacijo zmerno zahtevnih mikroorganizmov, ki lahko poveča obogatitev z dodatkom krvi in ​​drugih prehranskih dopolnil..

Je neselektivno gojišče, zato omogoča rast večine Gram pozitivnih in Gram negativnih bakterij kot tudi nekaterih gliv. Lahko pa postane selektiven z dodatkom antibiotikov.

Medij vsebuje infuzijo možganov in srca teleta, peptidni hidrolizat iz živalskih tkiv in kazein pankreatični hidrolizat; vse te spojine delujejo kot viri vitaminov, aminokislin, dušika in ogljika.

Glukoza je ogljikov hidrat, ki mikroorganizmom zagotavlja energijo, potem ko jo fermentira. Ker natrijev klorid in dinatrijev fosfat vzdržujeta osmotsko ravnovesje in zagotavljata pH blizu nevtralnosti. Končno, agar daje trdni konsistenci mediju.

Priprava

Natehtamo 52 g dehidriranega medija in raztopimo v enem litru destilirane vode. Mešanico segrejemo na vir toplote, dokler ne vre in med mešanjem med mešanjem pogosto.

Lahko pripravite klini ali plošče BHI agarja brez dodatkov.

Klini

Za pripravo klinov pripravo pripravite do polnjenja vsake epruvete, pokrijte in sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C za 15 minut, ko greste na ležišče na podlago, dokler se ne strdi. Nato shranite v hladilnik do uporabe.

Plošče

Raztopljeno mešanico avtoklaviramo pri 121 ° C 15 minut, ko jo pustimo ohladiti na 50 ° C in 20 ml medija oddamo v sterilne petrijevke. Dovoljeno je strjevanje, obračanje in shranjevanje v hladilniku, dokler se ne uporabijo. Pustite, da plošče pred sajenjem vzamejo sobno temperaturo.

PH medija mora biti 7,4 ± 0,2.

Nepripravljen medij je bež in pripravljen je svetlo oranžen.

Priprava krvnega agarja

Po sterilizaciji medija, ohladimo na temperaturo približno 45 do 50 ° C, dodamo kri (50 ml), previdno premešamo, da homogeniziramo in aseptično damo 20 ml v vsako petrijevko. Če se na plošči oblikujejo mehurčki, je treba plamen gorilnika hitro prenesti preko mehurčkov in jih odstraniti.

Prav tako lahko pripravimo posebne medije z dodajanjem ustreznih dodatkov, ko zmes doseže temperaturo od 45 do 50 ° C.

Medij je češnjevo rdeča.

Uporabe

Uporabite brez dodatkov

BHI agar brez dodatkov je uporaben kot primarna kultura in za sajenje čistih sevov mikroorganizmov, ki so srednje ali zmerno zahtevni za kasnejšo identifikacijo..

Ker je svetlo obarvan medij, je idealen za opazovanje pigmentov in tudi zato, ker ne vsebuje motečih snovi, lahko se uporablja za izvajanje biokemičnih preskusov, kot so oksidaza in katalaza, ali za druge biokemične teste iz kolonij, ki izvirajo iz tega. agar.

Podobno se BHI agar klinovi široko uporabljajo za vzdrževanje sevov za določen čas v laboratoriju (bakterioteka)..

Plošče ali klini, zasajeni na površini z bakterijskimi sevi, se inkubirajo 24 do 48 ur pri 37 ° C. Medtem ko je v glivah temperatura in čas inkubacije odvisna od vrste glive, ki se išče.

Kot bazični agar za pripravo drugih medijev

S to bazo lahko pripravimo obogatene in selektivne medije.

Obogaten

Njegova glavna funkcija je, da služi kot osnova pri pripravi krvnega agarja za rutinsko uporabo v mikrobioloških laboratorijih. Zlasti baza BHI vodi do izolacije sevov Streptococcus sp. Vendar ima pomanjkljivost, da ni primeren za opazovanje vzorcev hemolize, ker vsebuje glukozo.

Uporablja se tudi pri pripravi agarja za zajčje ali konjsko kri za izolacijo Haemophilus sp. Za boljše rezultate lahko dodate dodatek za obogatitev (IsoVitaleX).

Če vzorci prihajajo iz respiratornega trakta v agar, se lahko doda bacitracin, da zavre spremljajočo floro in poveča verjetnost za obnovitev sevov Haemophilus sp.

Po drugi strani pa lahko krvni agar (jagnjetina ali človek) pripravimo s teluritnim cistinom, da ga izoliramo Corynebacterium diphtheriae. Prav tako je koristno pripraviti agar zajčje krvi, z dodatkom cistina in glukoze za izolacijo \ t Francisella tularensis.

Sejanje plošč iz krvnega agarja poteka z izčrpanjem in inkubira pri 35-37 ° C 24-48 ur v mikroaerofilnih (5-10% CO).2).

Selektivno

Ta medij z dodatkom antibiotikov lahko nadomesti agar Sabouraud za izolacijo gliv.

Kombinacija BHI agarja s kloramfenikolom - gentamicinom ali penicilinom -, streptomicinom in konjsko kri je idealna za izolacijo Histoplasma capsulatum.

Glede na mikroorganizem, ki ga želite izolirati, je priporočena inkubacija pri 35-37 ° C ali pri sobni temperaturi pri aerobiozi. Včasih je inkubacija potrebna v obeh temperaturnih območjih, pri čemer se za to uporablja 2 ploščici.

Nekatere glivice Trichophyton mentagrophytes Inkubiramo jih pri sobni temperaturi do 7 dni.

Nadzor kakovosti

Iz vsake pripravljene serije je priporočljivo inkubirati 1 krožnik ali zagozdo pri 37 ° C 24 ur in preveriti, da ni rasti; Še posebej pomembno pri pripravi krvnega agarja, ker je to lahko kontaminiran medij.

Po drugi strani pa lahko kakovost medija ocenjujemo z inokulacijo znanih ali certificiranih standardnih sevov in opazovanjem njihovega razvoja.

V tem smislu oceniti BHI agar brez dodatkov, sevov Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 ali Candida albicans ATCC 10231. Inkubiramo jih pri 37 ° C v aerobiozi 24 do 48 ur. V vseh primerih se pričakuje zadovoljiva rast.

Za ovrednotenje krvnih agar plošč, sevov  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ali Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakterijske seve inkubiramo pri 37 ° C v mikroaerofiliku 24 ur, medtem ko se glive inkubirajo pri sobni temperaturi v vlažni komori do 7 dni. V vseh primerih se pričakuje zadovoljiva rast.

Reference

  1. Laboratoriji Britania. Brain Heart infuzija Agar. 2015. Na voljo na: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Agar z možgansko infuzijo (BHI). 2013. Na voljo na: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Bazični infuzijski agar. 2009.
  4. Neogen laboratorij. Bazični infuzijski agar. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar kri: temelj, uporaba in priprava. 2018. Na voljo na: lifeder.com.
  6. Prispevki Wikipedije. Infuzija možganskega srca Wikipedija, svobodna enciklopedija. 19. september, 2018, 03:58 UTC. Na voljo na: wikipedia.org. Dostopno 2. marca 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.