Baird Parker Agar temelj, priprava in uporaba



The Baird Parker agar je trden, selektiven in diferencialen medij kulture. Ustanovljen je bil leta 1962 za odkrivanje in koagulazno pozitivno štetje stafilokokov (Staphylococcus aureus).

Sestavljen je iz hidrolizata kazeina trebušne slinavke, mesnega ekstrakta, kvasnega ekstrakta, litijevega klorida, glicina, natrijevega piruvata, kalijevega telurita, emulzije agarja in jajčnega rumenjaka..

Agar Baird Parker temelji na sposobnosti S. aureus za zmanjšanje telurita in proizvodnjo lecitinaze. Obe lastnosti ustvarjata kolonijo s posebnimi značilnostmi za to vrsto. Zato ponuja veliko učinkovitost pri odkrivanju tega mikroorganizma.

Tipične kolonije S. aureus so črne ali temno sive barve, z brezbarvno obrobo in jasnim halojem, ki jih obdaja, razlikujejo se od ostalih mikroorganizmov. Ta patogen lahko najdemo v kliničnih vzorcih, vodah, kozmetičnih izdelkih in surovih ali kuhanih živilih.

Njegova diagnoza ali odkrivanje je zelo pomembna zaradi raznolikosti patologij, ki jih povzroča, kot so zastrupitev s hrano, sindrom poparjene kože, sindrom toksičnega šoka, abscesi, meningitis, septikemija, endokarditis..

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Hranilna moč
    • 1.2 Selektivno
    • 1.3 Diferenca
  • 2 Priprava
    • 2.1 Emulzija jajčnega rumenjaka
    • 2.2 Kalijev telurit pri 1% m / v
    • 2.3 Priprava gojišča
  • 3 Uporabite
    • 3.1 Klinični vzorci
    • 3.2 Vzorci hrane
    • 3.3 Vzorci vode
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Priporočila
  • 6 Reference

Fundacija

Hranilna moč

Kazein pankreatični hidrolizat, mesni ekstrakt in ekstrakt kvasa so viri hranil, vitaminov in mineralov, ki so potrebni za splošni mikrobiološki razvoj, medtem ko sta piruvat in glicin spojine, ki spodbujajo specifično rast. Staphylococcus aureus.

Selektivno

Agar Baird Parker je selektiven, ker vsebuje snovi, ki zavirajo rast spremljajoče flore, hkrati pa spodbujajo razvoj S. aureus. Zaviralne spojine so litijev klorid in kalijev telurit.

Diferencial

To pomeni, da je mogoče razlikovati S. aureus koagulaza negativnih Staphylococcih. S. aureus ima sposobnost zmanjšanja telurita na črni kovinski prosti telur, ki tvori črne ali temno sive kolonije.

Prav tako jajčni rumenjak zagotavlja substrate za dokaz prisotnosti encima lecitinaze in lipaze. S. aureus je pozitivna lecitinaza, zato bo opazen jasen halo okoli kolonije, kar kaže, da je bil lecitin hidroliziran..

V tem smislu je pojav v tem agarju črnih ali temno sivih kolonij, ki so svetle in svetlega halo, označujejo prisotnost S. aureus. 

Če nastane območje padavin, je indikativno, da obstaja lipazna aktivnost. Nekateri sevi. \ T S. aureus so pozitivne lipaze in druge negativne.

V primeru, da S. aureus Če je lipaza pozitivna, bo opazila motno območje okoli črne ali temno sive kolonije, nato pa bistro halo zaradi delovanja lecitinaze..

Kolonije bakterij, ki niso S. aureus lahko rastejo v tem mediju, se razvije brezbarvna ali rjava kolonija, brez halo okoli.

Atipične črne kolonije lahko opazimo tudi z ali brez brezbarvne meje, vendar brez jasnega haloja. Te kolonije se ne smejo upoštevati, ne ustrezajo S. aureus.

Priprava

Emulzija jajčnega rumenjaka

Vzemite sveže piščančje jajce, ga dobro operete in ga položite 2 do 3 ure v 70% alkohol. Potem se jajčece aseptično odpre in beljak se previdno loči od rumenjaka. Nato vzamemo 50 ml rumenjaka in zmešamo s 50 ml sterilne fiziološke raztopine.

Kalijev telurit pri 1% m / v

Nekatere komercialne hiše prodajajo 1% kalijevega telurita, pripravljenega za uporabo. Doda se mediju, preden se medij strdi.

Za pripravo te raztopine v laboratoriju stehtajte 1,0 g kalijevega telurita in ga raztopite v delu vode. Nato se količina vode dopolni do 100 ml. Raztopino je treba sterilizirati s filtracijsko metodo.

Priprava gojišča

Natehtamo 60 g dehidriranega medija in raztopimo v 940 ml destilirane vode. Mešanico pustite stati približno 5 do 10 minut.

Toploto nanesite tako, da pogosto mešate medij, da izboljšate postopek raztapljanja. Počakajte minuto. Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Pustite stati, dokler ne doseže temperature 45 ° C, in dodajte 50 ml emulzije rumenjaka in 10 ml 1% telurita. Dobro premešajte in dodajte 15 do 20 ml na sterilne petrijevke.

Pustite, da se strdi, naročite obrnjen plakat in ga shranite v hladilnik do uporabe.

Končni pH pripravljenega medija mora biti 6,8 ± 0,2.

Preden zasadite vzorec, počakajte, da plošča prevzame temperaturo okolja. Plošče sejamo z nasaditvijo ali s sejanjem na površino z Drigalsko lopatico.

Barva dehidriranega medija je svetlo rjave barve in barva pripravljenega medija je svetlo rumena.

Uporabite

Klinični vzorci

Klinični vzorci se sejejo neposredno z izpustom dela materiala na en konec plošče in od tam potekajo z izčrpanjem. Inkubiramo 24 do 48 ur pri 35-37 ° C.

Vzorci hrane

Natehtamo 10 g vzorca hrane in ga homogeniziramo v 90 ml 0,1% peptonirane vode, od tam pripravimo razredčine, če je potrebno. Plošče nacepimo v trojniku z 0,3 ml pripravljenih raztopin in sesamo na površino z Drigalsko lopatico. Inkubiramo 24 do 48 ur pri 35-37 ° C.

Ta metodologija omogoča štetje tipičnih pridobljenih kolonij in je idealna, kadar je prisotna S. aureus na 10 g / ml vzorca.

Če sumite, da je znesek S. aureus majhna je ali je veliko spremljajoče flore, priporočamo, da vzorec obogatimo s triptikazno sojino juho z 10% NaCl in 1% natrijevega piruvata. To bo pripomoglo k rasti S. aureus zavira razvoj spremljajoče flore. Tubuse, ki so motne, bomo posadili na agar Baird Parker.

Vzorci vode

V vakuumskem filtracijskem sistemu in steriliziramo 100 ml vode in nato 0,4 mikronske mikroporozne membrane odstranimo s sterilno objemko in postavimo na Baird Parker ploščo. Inkubiramo 24 do 48 ur pri 35-37 ° C. Ta tehnika omogoča štetje tipičnih kolonij S. aureus.

Nadzor kakovosti

Za oceno kakovosti agarja Baird Parker lahko uporabimo znane seve, kot npr Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ali Proteus mirabilis ATCC 43071.

V primeru sevov. \ T S. aureus Znano je, da ATCC zmanjšuje telurit in da je pozitivna lipaza in lecitinaza. Zato mora biti zadovoljiv razvoj in rasti konveksne kolonije s črnim središčem in brezbarvnim robom, z neprozornim halojem in drugim halo bolj zunanjim..

Po drugi strani pa S. epidermidis v tem mediju se pričakuje slab razvoj, s sivkasto rjavo do črno kolonijo, brez jasnega haloja.

Za E. coli in P. mirabilis pričakuje se, da bo popolnoma ali delno zavrnjena. V primeru gojenja se bodo rjave kolonije razvile brez neprozorne cone in ne jasnega haloja.

Priporočila

-Po dodajanju telurita in rumenjaka se medij ne segreva.

-Priprava emulzije jajčnega rumenjaka in njeno dodajanje v medij sta zelo ranljiva stopnja kontaminacije. Izredna previdnost je potrebna.

-Če so prisotne tipične kolonije S. aureus je treba potrditi z nameščanjem koagulaznega testa na navedeni sev.

-Če se s koagulazo pojavijo dvomljivi rezultati, je treba namestiti druge potrditvene teste.

-Bodite previdni, da ne zamenjate prisotnosti tipičnih kolonij S. aureus z atipičnimi kolonijami črne barve.

Reference

  1. Prispevki Wikipedije. Baird-Parkerjev agar. Wikipedija, svobodna enciklopedija. 15. marec 2017, 19:36 UTC. Na voljo na: wikipedia.org/ Dostopno od 18. februarja 2019.
  2. BD Laboratories. Agar Baird Parker. 2006. Na voljo na: bd.com
  3. Laboratoriji Britania. Podlaga za agar Baird Parker. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratoriji. 2009. Agar Baird Parker. Na voljo na: http://f-soria.es/Inform
  5. Laboratoriji Britania. Kalijev telurit. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Staphylococcus aureus enterotoksigenskega tipa A, v nazofaringealnih brisih pri uporabnikih hrane. Rev Med Čile 2017; 145: 1559-1564
  7. Venezuelski standard Covenin 1292-89. (1989). Hrana Izolacija in štetje Staphylococcus aureus. Na voljo v:sencamer.gob.ve