MIO temeljna podlaga, priprava in uporaba



The polovico MIO je biokemični test, ki se uporablja za identifikacijo vrst bakterij iz družine Enterobacteriaceae. Je precej hranljiva in je sestavljena iz glukoze, ekstrakta kvasa, peptona, triptina, L-ornitinijevega klorida, bromokrezolnega vijoličnega in agarja.

Pomen njegove kratice (MIO) opisuje vsakega od parametrov, ki jih je mogoče opaziti v tem mediju; motilnost, indol in ornitin. Motilnost je sposobnost mikroorganizma, da se premika s prisotnostjo flagel. Da bi to lastnost opazili, mora biti konsistenca medija poltrdna, tako da ima pripravek manjšo količino agarja..

Proizvodnja indola dokazuje prisotnost encima triptofanaze, ki deluje na aminokislino triptofan, pri čemer je potrebna uporaba razkrivnega reagenta, ki omogoča proizvodnjo indola vidno..

Končno, ornitin določa, ali je bakterija sposobna dekarboksilirati aminokislino, to je, če ima encim orinitin dekarboksilazo..

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Pepton, ekstrakt kvasovk in triptin
    • 1.2 Motilnost
    • 1.3 Glukoza
    • 1,4 L-ornitin
    • 1,5 kazalnik pH
  • 2 Tehnika sejanja in razvoja
  • 3 Priprava
    • 3.1 MIO Srednje
    • 3.2 Kovacsov reagent (Indolski testni razvijalec)
  • 4 Uporabite
  • 5 Nadzor kakovosti
  • 6 Reference

Fundacija

Pepton, ekstrakt kvasovk in triptin

Ti elementi prispevajo k prehranski moči tega medija. Služijo kot vir hranil in esencialnih aminokislin za razvoj bakterij.

Poleg tega je triptein vir triptofana, ki dokazuje prisotnost encima triptofanaze, ki razgrajuje triptofan z reduktivno deaminacijo, ki sprosti indol, piruvično kislino, amoniak in energijo..

Indol je brezbarven, zato se njegova prisotnost pokaže z dodajanjem petih kapljic reagenta Ehrlich ali Kovacs, oba s p-dimetilaminobenzaldehidom.

Aldehidna skupina te spojine reagira z indolom, pri čemer na površini agarja nastane obročast fuchsia-rdeč produkt.

Vsaka sled barve je treba šteti za pozitiven dokaz. Test je treba takoj prebrati, ker se barva čez nekaj časa razgradi.

Po drugi strani pa je treba ta test razkriti, ko smo zabeležili rezultate gibljivosti in dekarboksilacije ornitina..

Razlaga

Pozitivni test: tvorbo fuksije rdečega obroča pri dodajanju kapljic Kovacsovega reagenta.

Negativni test: ni obroča.

Motilnost

Sposobnost bakterij, da se premaknejo, se pokaže, če opazimo moten medij ali če je debela linija rasti, ki se širi okoli začetne inokulacije..

Negativni test gibljivosti bo dokazan z opazovanjem tanke linije rasti in vse okoli bo brez rasti.

Pomembno je, da se motilnost prebere, preden se razkrije indol, saj dodatek reagenta prekrije celoten medij.

Pri mobilnih, vendar počasi rastočih bakterijah je težko dokazati njihovo gibljivost s tem medijem. V tem primeru je priporočljivo uporabiti druge teste ali metode, kot je medij za gibljivost ali metoda kapljice.

Glukoza

Glukoza je ogljikov hidrat, ki ga je mogoče fermentirati, ki poleg zagotavljanja energije zakisli medij, je nujen pogoj za dekarboksilacijo aminokisline ornitina..

Fermentacija glukoze mora vedno potekati na podlagi načela, da vse bakterije iz družine Enterobacteriaceae fermentirajo glukozo..

L-ornitin

Če bakterija proizvaja encim ornitin dekarboksilazo, lahko deluje, ko je gojišče nakisano z fermentacijo glukoze..

Encim ornitin dekarboksilaza deluje na karboksilno skupino aminokisline, ki proizvaja amin, imenovan putresin, ki ponovno alkalizira medij..

Ta preskus je treba prebrati po 24 urah inkubacije, ker če poskusite prebrati, preden lahko napačno interpretirate test z lažno negativnim.

Ne smemo pozabiti, da se prva reakcija, ki se pojavi, je fermentacija glukoze, tako da medij postane rumena v začetni fazi (prvih 10 do 12 ur). Če se kasneje pojavi dekarboksilacija ornitina, bo medij postal vijoličen.

Pomembno je interpretirati ornitinski dekarboksilacijski test pred razkritjem indola, ker dodatek Kovacsovega reagenta spremeni barvo medija..

Razlaga

Negativni test: srednje rumena ali rumena.

Pozitivni test: popolnoma vijolična.

Indikator PH

V tem primeru se uporablja bromokrezol vijolična; oseba, ki je odgovorna za razkrivanje, kdaj pride do spremembe pH v sredini. Ko je žveplen, se indikator obarva rumeno in ko je alkaliziran vijoličen.

Semena in razvojna tehnika

Da bi posadili MIO medij, uporabimo ravno zanko ali iglo in z njo zberemo del kolonije, ki jo je treba raziskati..

V mediju MIO poteka globoka punkcija v ravni liniji. Ni priporočljivo izvajati dvojne punkcije, saj lahko povzroči napačno motilitetno sliko, če se punkcije ne izvajajo na istem mestu.

Inkubiramo 24 do 48 ur pri 37 ° C v aerobiozi. Rezultate opazujte v tem vrstnem redu: gibljivost, dekarboksilacijo ornitina in končno razkrili indol.

Priporočljivo je aseptično vzeti 2 ml medija, ga prenesti v sterilno epruveto in tam opraviti indolni test, tako da lahko, če je negativen, preostanek originalne epruvete inkubiramo 24 ur, da ponovno odkrijemo indol..

Razvoj indola izvedemo na naslednji način: 3 do 5 kapljic Kovacovega reagenta dodamo MIO mediju in močno mešamo. Opazimo ga, če se pojavi rdeči obroč fuksije ali ne.

Priprava

Polovica MIO

Natehtamo 31 g medija MIO in raztopimo v enem litru destilirane vode.

Segrevajte, dokler mešanica ne zavre eno minuto, pri čemer pogosto mešate, dokler se agar popolnoma ne raztopi. Porazdelite 4 ml medija v 13/100 epruvete z bombažnim pokrovom.

Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut. Odstranite iz avtoklava in pustite, da stoji ravno v stojalu, tako da se oblikuje poltrdni blok.

Shranjujte v hladilniku 2-8 ° C. Pred zasejanjem bakterijskega seva pustite, da se strdi.

Barva dehidriranega medija je beige in barva medija pripravljena rahlo vijolična opalescentna.

Končni pH pripravljenega medija je 6,5 ± 0,2

Medij postane rumeno s kislim pH in vijoličen pri alkalnem pH.

Kovacsov reagent (Indolski testni razvijalec)

Ta reagent se pripravi kot sledi: \ t

Izmerimo 150 ml amila, izoamila ali butil alkohola (katerega koli od treh). V njej raztopimo 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Nato počasi dodamo 50 ml koncentrirane klorovodikove kisline.

Pripravljeni reagent je brezbarven ali svetlo rumene barve. Shraniti ga je treba v rumeni steklenički in hraniti v hladilniku. Temno rjava barva kaže njeno poslabšanje.

Prav tako lahko Kovacsov reagent nadomestimo z Ehrlichovim reagentom. Slednje, ki so bolj občutljive, imajo prednost pri razkrivanju indola v bakterijah, ki ga proizvajajo v minimalnih količinah, kot pri nekaterih gram negativnih nefermentacijskih bacilih in nekaterih anaerobih..

Uporabite

Ta medij je test, ki dopolnjuje niz biokemičnih testov za identifikacijo bakterij iz družine Enterobacteriaceae..

Podatki o dekarboksilaciji ornitina služijo za diferenciacijo Shigella sonnei, ki daje pozitivno, od Shigella boydii, Shigella flexneri in S. dysenterieae, ki dajejo negative.

Razlikuje tudi rod Klebsiella, ki daje negativni rod Enterobacter, kjer je večina njegovih vrst pozitivna.

Nadzor kakovosti

Vsakič, ko pripravimo serijo MIO medija, lahko izvedemo kontrolni test. Pri tem se za opazovanje obnašanja medija uporabljajo znani ali certificirani sevi.

Sevi, ki jih lahko uporabimo, so Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes in Proteus mirabilis.

Pričakovani rezultati so E. coli in M. morganii. Dan M: +, I: + in O: +.

Klebsiella pneumoniae daje vse negativne (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis in Enterobacter aerogenes dan M: + I: - in O: +.

Reference

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemični testi za identifikacijo klinično pomembnih bakterij. 3. izd. Uvodnik Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratoriji Britania. MIO Medio 2015. Na voljo na: britanialab.com
  5. BD Laboratories BBL motilitetni indol ornitin (MIO) medij. 2007. Na voljo na: bd.com
  6. Laboratoriji Valtek Medium M.I.O. Motilnost, indol, ornitin. 2010. Na voljo na: andinamedica.com