Peptonski vodni temelj, pripravek in uporaba



The peptonada vode je neselektivno tekoče obogatitveno sredstvo, ki se uporablja predvsem kot razredčilo za vzorce hrane ali druge materiale. To pomeni s kemičnega vidika zelo preprosto, vsebuje pepton iz mesa, natrijevega klorida in vode.

Ima določeno hranilno vrednost, ki omogoča obogatitev vzorca. Če so uničene bakterije, ima to sredstvo moč, da popravi sposobnost preživetja. Še posebej je koristen pri obnavljanju bakterij iz družine Enterobacteriaceae.

V primeru obnovitve salmonel se priporoča uporaba puferske variante vode peptonade; To služi kot sredstvo za predhodno obogatitev vzorca, v tem primeru vsebuje druge elemente, kot so dinatrijev fosfat in dikalijev fosfat..

Običajno se peptonada voda pripravi pri nevtralnem pH, vendar obstajajo tudi druge variante, kjer je potrebno, da je pH 8,5 ± 0,2 (alkalna), ker so bakterije, ki se izolirajo, alkalofilne, kot na primer Vibrio cholerae.

Po drugi strani pa lahko ta medij uporabimo kot osnovni medij za teste fermentacije ogljikovih hidratov.

Indeks

  • 1 Fundacija
  • 2 Priprava
    • 2.1 Priprava na dom (nekomercialna)
    • 2.2 Priprava s komercialnim medijem
    • 2.3 Priprava za teste fermentacije
    • 2.4 Druge variante vode peptonade
  • 3 Uporabite
    • 3.1 Vzorci blata
    • 3.2 Vzorci hrane
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Omejitve
  • 6 Reference

Fundacija

Peptoni zagotavljajo hranilne snovi, potrebne za razvoj bakterij, zlasti dušikove in kratkolančne aminokisline, medtem ko natrijev klorid ohranja osmotsko ravnovesje..

Poleg tega medij omogoča razprševanje, homogeniziranje in popravljanje bakterijskih celic, ki so jih poškodovali industrijski procesi..

Kot razredčilo je idealna, učinkovito nadomešča fiziološko raztopino (SSF) ali fosfatni pufer (PBS)..

Bakterijska rast je vidna z opazovanjem motnosti.

Priprava

Domača priprava (nekomercialna)

Stehtamo 1 g peptona in 8,5 g natrijevega klorida, raztopimo v 1 litru destilirane vode. PH je treba prilagoditi na 7,0. Za to lahko uporabite 1 N natrijev klorid.

Priprava z uporabo komercialnega medija

Natehtamo 15 g dehidriranega medija in raztopimo v enem litru destilirane vode. Homogeniziramo zmes. Če je potrebno, zmes kuhamo 1 minuto, da pomagamo pri popolnem raztapljanju. Po potrebi postrezite v 100 ml vialah ali v 10 ml epruvetah. Avtoklaviraj 15 minut pri 121 ° C.

Ohladite in uporabite ali shranite v hladilniku. Končni pH medija je 7,2 ± 0,2.

Barva dehidriranega medija je svetlo beige in pripravljena je svetlo rumena.

Priprava za teste fermentacije

Prejšnjemu pripravku - pred sterilizacijo - je treba ogljikovim hidratom dodati končno koncentracijo 1%, plus Andradejev indikator (kislo fuksin) ali fenol rdeč (0,018 g / L). Na cevke je treba namestiti zvok Durham za opazovanje tvorbe plina.

Druge variante vode peptonada

-Peptonska puferirana ali puferirana voda

Vsebuje encimski hidrolizat kazeina, natrijev klorid, kalijev dihidrogenfosfat in natrijev hidrogenfosfat dodekahidrat. Končni pH je 7,0 ± 0,2.

Za njegovo pripravo stehtamo 20 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Pustite stati približno 5 minut. Segrejemo 1 minuto, dokler se popolnoma ne raztopi.

Po potrebi nalijte v ustrezne steklenice. Sterilizirajte z avtoklavom pri 121 ° C 15 minut.

-Alkalno peptonirana voda

Natehtamo 25 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru vode. Nadaljujte, kot je opisano zgoraj. PH se giblje med 8,3 in 8,7.

Uporabite

Inokulum se opravi tako, da se vzorec namesti neposredno.

Uporablja se za razredčenje vzorcev, zlasti če obstaja sum, da so poškodovane bakterije. Ponavadi so razredčitve 1:10 in 1: 100.

Inkubiramo 24 ur v aerobiozi pri 35-37 ° C.

Vzorci blata

Za vzorce blata, ki iščejo salmonelo, se priporoča uporaba puferske ali puferirane vode kot medija za predobogatitev..

To naredite na naslednji način:

Če nastane blato, vzemite 1 g vzorca. Če so tekoči, vzemite 1 ml blata in suspendirajte v epruveti z 10 ml pufrske peptonirane vode. V primeru rektalnih brisov iztisnite material, ki ga vsebuje bris, v epruveto s pufrsko peptonirano vodo.

V vseh primerih vzorec dobro premešamo in homogeniziramo.

Inkubiramo 18 do 24 ur pri 37 ° C. Nato se 18-24 ur goji v bujonu za obogatitev, kot je selenitna cistinska brozga ali tetrationatna juha pri 37 ° C. Končno gojimo v selektivnih medijih za salmonelo, kot so SS agar, XLD agar, Hektoen agar, med drugim.

Vzorci hrane

Peptonska voda se uporablja kot sredstvo za obogatitev ali kot enostavno razredčilo, če pa se iščejo vrste Salmonella, se uporablja kot medij za predobogatitev, kot je že opisano..

V živilih: \ t

Za trdna živila tehtamo 25 g vzorca, za tekoča živila pa 25 ml vzorca. Navedeni del prenesemo v bučke, ki vsebujejo 225 ml peptonirane vode. Vzorec se zmeša in homogenizira.

Če obstaja sum, da je mikrobiološka obremenitev visoka, se lahko opravijo redčenja ali decimalne številke, da se olajša štetje enot, ki tvorijo kolonije (CFU)..

Število razredčitev bo odvisno od vrste vzorca in analitične izkušnje.

V nasprotnem primeru obstaja sum, da je mikrobiološka obremenitev zelo nizka, zato ni treba opraviti redčenja. Nato se subkultivirajo v selektivnih medijih.

V primeru hrane iz morja, kot so morski sadeži, ribe med drugim iščejo Vibrio cholerae ali druge vrste Vibrio, je treba uporabiti peptonsko vodo, prilagojeno na pH 8,5 (alkalna peptonirana voda).

Nadzor kakovosti

Iz vsake pripravljene serije je treba eno do dve epruveti inkubirati brez inokulacije 24 ur v aerobiozi pri 37 ° C. Ob koncu časa ne smete opazovati motnosti ali spremembe barve.

Za oceno njihove učinkovitosti se lahko uporabijo tudi dobro znani kontrolni sevi: \ t

Za to se lahko uporabijo naslednji bakterijski sevi: \ t Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

V vseh primerih se pričakuje zadovoljiv razvoj mikroorganizmov, ki ga opazimo zaradi motnosti medija.

Omejitve

-Dehidrirani medij je zelo higroskopičen, zato ga je treba hraniti ločeno od vlage.

-Medij se ne sme uporabiti, če opazimo kakšno vrsto poslabšanja.

-Dehidrirano gojišče shranjujte med 10 - 35 ° C

-Pripravljeni medij je treba hraniti v hladilniku (2–8 ° C)..

Reference

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B in Velázquez O. Tehnike za mikrobiološko analizo živil. 2009, 2. izd. Fakulteta za kemijo, UNAM. Mehika Različica za administratorja priročnikov in dokumentov (AMyD) Kemijske fakultete, UNAM 1. Na voljo na: http://depa.fquim.unam.mx
  2. Laboratoriji Britania. Pufrirana peptonada voda. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  3. Laboratoriji Neogen Peptonska voda. Na voljo na: foodsafety.neogen.com
  4. Laboratoriji Britania. Peptonska voda. 2015. Na voljo na: britanialab.com
  5. Merck Laboratories Pufrirana peptonska voda. Na voljo na: merckmillipore.com
  6. Laboratoriji Conda Pronadisa. Alkalno peptonirana voda. Na voljo na: condalab.com
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 ed. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.