Priprava medijev kulture, iz česar je sestavljena, cilji in koraki



The priprava medijev kulture To je rutinska metodologija, ki se uporablja v laboratorijih za rast želenih mikroorganizmov. Gojišča so trdni, tekoči ali poltrdni pripravki, ki imajo vsa hranila, potrebna za razvoj mikrobne populacije.

Na splošno so sredstva za rast mikroorganizmov bogata z beljakovinami in aminokislinami in običajno vsebujejo nekatere sestavine, ki spodbujajo rast organizma, ki ga želite študirati, kot so vitamini, kri, serum, med drugim..

Ni splošnega ali univerzalnega gojišča, saj se njegova sestava razlikuje glede na potrebe mikroorganizma, ki nas zanima. Nekatere bakterije se lahko razvijejo v katerem koli gojišču, druge pa imajo posebne zahteve.

Indeks

  • 1 Kaj vsebuje??
    • 1.1 Agar
    • 1.2 Tekočine
    • 1.3 Izvlečki
    • 1.4 Peptoni
    • 1.5 Blažilniki
  • 2 Cilji
  • 3 Vrste medijev
    • 3.1 Na podlagi svoje sestave
    • 3.2 Glede na vrsto mikroorganizma
  • 4 koraka
  • 5 Reference

Od česa je sestavljen??

Mikroorganizmov, kot so glivice in bakterije, zaradi majhne velikosti ni mogoče preučevati individualno. Zato jih je treba gojiti na umetne načine, ki omogočajo znatno povečanje populacije.

Na primer, če želimo študirati bakterije, jim moramo zagotoviti prave pogoje, da se lahko razmnožijo in tvorijo kolonijo (ki jo lahko opazimo s prostim očesom)..

Priprava gojišča se zelo razlikuje glede na vrsto mikroorganizma, ki ga želimo gojiti. Pred pripravo je potrebno poznati osnovne prehranske potrebe delovnega telesa.

Nato bomo opisali najpogostejše sestavine, ki se uporabljajo v gojiščih, da imajo splošno predstavo o njihovi pripravi:

Agar

Uporablja se v rastlinah kot gelirno sredstvo in se doda pri iskanju trdnega ali poltrdnega medija. Prvo sredstvo za strjevanje, uporabljeno pri pripravi medijev, je bila želatina, leta 1883 pa je agar v svet bakteriologije uvedel W. Hesse..

Bakteriološki agar ima za svojo glavno komponento polisaharid kompleksnih vej, pridobljenih iz alg. Ta spojina se uporablja kot zgoščevalnik za običajna živila, kot so sladoled in marmelade.

To je zelo dragocen element v mikrobiologiji iz več razlogov. Predvsem zato, ker se mikroorganizmi ne morejo razgraditi, utekočinijo pri temperaturi 100 ° C in ostanejo v tekočem stanju, dokler ne dosežejo 45 ° C ali manj..

Če želite pripraviti trdno gojišče, naj bo koncentracija agarja okoli 1,5%, poltrdne pa od 0,3 do 0,5%..

Tekočine

Za gojenje patogenih organizmov so potrebne telesne tekočine, da se lahko razvijejo tako kot v svojem naravnem okolju. Zato se doda cela ali defibrilirana kri. Tekočino ekstrahiramo iz zdrave živali in jo, ko jo steriliziramo, dodamo v gojišče.

Izvlečki

Dobijo se iz različnih živalskih delov (kot so meso ali jetra) ali zelenjave (semena) in predelajo, da dobimo trdni koncentrat v obliki paste ali prahu. Najpogostejši so kvas, slad in meso.

Peptoni

Te organske spojine dobimo z encimsko ali kemično hidrolizo živalskih ali rastlinskih tkiv. Namen je dodati vsebino, bogato z aminokislinami, ki so temeljne enote beljakovin.

Amortizerji

Pufri ali puferski sistemi preprečujejo nenadne spremembe pH in pomagajo ohranjati optimalno območje, ki ga telo tolerira.

Večina organizmov se lahko pravilno razvije pri pH 7, čeprav nekatere bakterije raje uporabljajo alkalne medije. Vendar pa obstajajo bakterije, ki so odporne na spremembe pH med vrednostmi 6 in 9.

Pri vrstah, občutljivih na pH, poškodbe ne nastanejo zaradi prevelike količine vodika ali hidroksilnih ionov, ampak s povečanjem šibkih kislin ali baz, ki lahko prodrejo v celico..

Dodani so tudi kazalniki, da je pH za spremljanje in preprečevanje odstopanj, ki jih povzroča fermentacija ali drugi postopki.

Cilji

Glavni cilj pri pripravi gojišča je dodati vse potrebne sestavine, ki omogočajo uspešen razvoj organizma, ki želi biti izoliran. Za doseganje želenega medija je treba opredeliti najučinkovitejšo kombinacijo sestavin in hranil.

Priprava in shranjevanje medija sta bistvenega pomena za zagotovitev uspešne rasti, saj so ti koraki odvisni od sestave okolja in razpoložljivosti hranilnih snovi..

Upoštevati je treba, da je gojenje mikroorganizmov naloga, na katero vpliva več dejavnikov, ki so zunaj gojišča, kot so intenzivnost sprejete svetlobe, temperatura in stopnja kislosti ali alkalnosti medija. Zato je treba upoštevati vsako od teh spremenljivk.

Vrste medijev

Na podlagi svoje sestave

Na podlagi svoje sestave obstajajo tri glavne vrste pridelkov: naravno ali empirično, polsintetično in opredeljeno sintetično ali kemično sredstvo.

Naravno okolje

V naravnem okolju natančna sestava ni znana. Te vključujejo sestavine, kot so mleko, razredčena kri, zelenjavni sokovi, izvlečki in poparki mesa in peptonov. Iz ekonomskih razlogov se pogosto dodajajo nizki stroški, kot so izvlečki iz soje, sirotke, melase itd..

Polsintetični mediji

Imenuje se polsintetični medij, če je njegova sestava delno znana. Vsak medij, ki vsebuje agar, postane polsintetični medij.

Med njimi imamo papa dekstrozni agar, czapek-dox agar, ovseni agar, peptonski agar, med drugimi primeri..

Sintetični ali kemično določen medij

V tem primeru je sestava medija - glede na količino ogljika, dušika, žvepla, fosforja in vseh drugih virov rastnega faktorja - v celoti znana. To je zelo koristno, če želite pridobiti ponovljive rezultate za druge raziskovalce.

Za tako imenovane "mikroorganizme s posebnimi zahtevami za rast" je treba dodati potrebne sestavine. Primer te vrste so Lactobacillus.

Glede na vrsto mikroorganizma

Podobno obstaja tudi druga klasifikacija za gojišče, ki temelji na tipu mikroorganizma, ki lahko raste v njem. Po tem načelu imamo naslednja splošna sredstva za obogatitev, selektivnost in diferencial. Vsak od njih je opisan spodaj:

Splošna sredstva

Ti priznavajo razvoj številnih mikroorganizmov. Če kateri koli organizem potrebuje posebne pogoje za svojo rast, se pri tej vrsti pridelka ne bo mogel uspešno razviti.

Obogatitev pomeni

Sredstva za obogatitev spodbujajo rast določene vrste mikroorganizmov, vendar ni bila dodana nobena snov, ki bi preprečila rast drugih vrst mikroorganizmov..

Selektivni mediji

Iščejo specifično rast mikroorganizma, imenujejo jo glivice, bakterije, protozoe, med drugim. Za to zavirajo razvoj drugih.

Za dosego tega cilja lahko dodamo smrtonosne kemične spojine za veliko skupino mikroorganizmov in neškodljive za organizem, ki nas zanima, ali dodamo energijske vire, ki jih lahko izenači le iskani mikroorganizem..

Selektivni mediji se uporabljajo pri jemanju medicinskih vzorcev za rast patogenega mikroorganizma. Pri tem je treba spodbujati rast patogena in zavirati razvoj normalne mikrobne flore pri pacientu.

Bizmutov sulfitni agar, na primer, ne dopušča rasti gram-pozitivnih bakterij in velikega števila bakterij v gastrointestinalni votlini. Zato se uporablja za gojenje gram-negativnih bakterij, ki povzročajo tifus, Salmonella typhi v fekalnih vzorcih.

Diferencialni mediji

Ta vrsta uporablja nekatere diagnostične značilnosti organizma, ki nas zanima (posebnosti v njegovem metabolizmu, na primer), da jih lahko identificira proti drugi vrsti, ki raste v istem okolju.

Različni mediji in selektivni mediji so zelo koristni na področju klinične mikrobiologije in javnega zdravja, saj morajo te discipline odkriti prisotnost specifičnih mikroorganizmov, povezanih s slabimi higienskimi pogoji ali pogoji..

Sestavnim indikatorjem se lahko dodajo snovi, ki dajejo značilno lastnost želeni koloniji. Na primer, agar-eozin-metilen modro (skrajšano EMB) in MacConkey-agar dodamo z laktozo in indikatorjem pH.

Kadar se v teh medijih razvije kolonija s sposobnostjo fermentacije laktoze in proizvodnje aldehidov, jih je mogoče opaziti v posebni barvi..

Koraki

Trenutno lahko gojitveni medij kupimo v liofilizirani obliki. Zato se pripravek olajša in rehidrira samo izdelek. Vsebino je treba stehtati (ob upoštevanju končne količine, ki jo želite pripraviti) in raztopiti v destilirani vodi po vseh indikacijah proizvoda..

Vsebnost tekočega medija je treba razdeliti v želene posode (petrijevke, cevi itd.) Za nadaljnjo sterilizacijo. Za porazdelitev trdnega medija jo je treba taliti z mikrovalovno pečico ali z izpostavitvijo materiala vodni kopeli. PH medija je treba prilagoditi.

Običajno se agar uporablja v epruvetah ali v petrijevkah. Če se agar strdi v nagnjenem položaju z ustreznim kotom, tako da je končni rob diagonalno, je ta ureditev znana kot vrh piščal ali nagnjene cevi. Ko se agar strdi v popolnoma navpičnem položaju, se imenuje "globoko".

Po sterilizaciji medija - z avtoklavom - se ohladi. Z njimi je treba ravnati v okolju brez mikroorganizmov, najpogosteje pa je delo z osvetljenim vžigalnikom, ki zagotavlja aseptično okolje v njegovi bližini..

Reference

  1. Celis, J. E. (2006). Celična biologija: laboratorijski priročnik (Vol. 2). Elsevier.
  2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M., & Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: mikrobiološka diagnoza. Pan American Medical.
  3. Olivas, E. (2004). Priročnik praks mikrobiologije I in II ter parazitologija. Avtonomna univerza Ciudad Juárez.
  4. Schlegel, H. G., in Zaborosch, C. (1993). Splošna mikrobiologija. Cambridge University Press.
  5. Tortora, G. J., Funke, B. R., in Case, C. L. (2007). Uvod v mikrobiologijo. Ed Panamericana Medical.