Polovica SIM ustanavljanja, priprave in uporabe



The pol SIM Je poltrdni in diferencialni agar, ki je posebej zasnovan za identifikacijo nekaterih bakterij, predvsem iz družine Enterobacteriaceae. Sestavljen je iz tripteina, peptona, železovega sulfata, amonijevega sulfata, natrijevega tiosulfata in agarja.

Ta medij omogoča izvedbo treh pomembnih testov: proizvodnja vodikovega sulfida (H2S), tvorba in gibljivost indola, zato je kratica SIM. Zaradi velike uporabnosti ne more manjkati v bakteriološkem laboratoriju.

Za razliko od drugih medijev, mora biti to poltrdno, tako da se lahko zaznava gibljivost nekaterih bakterij. V tem smislu ta test zelo dobro deluje na enterobakterije, ne pa tudi na gramnegativne, nefermentacijske bacile, kjer je zaželeno, da se uporabijo druge metode, kot je npr..

Sredstvo SIM omogoča razlikovanje nekaterih specifičnih lastnosti, ki so značilne za nekatere bakterije v primerjavi z drugimi. Na primer Escherichia coli odlikuje ga H2S (-), indol (+) in gibljivost (+), medtem ko Proteus mirabilis to je H2S (+), indol (-), gibljivost (+).

Indeks

  • 1 Fundacija
    • 1.1 Vir napajanja
    • 1.2 Proizvodnja vodikovega sulfida
    • 1.3 Nastajanje indola
    • 1.4 Motilnost
  • 2 Priprava
    • 2.1 Polovica SIM
    • 2.2 Kovakov reagent
    • 2.3 Erlich reagent
  • 3 Uporabe
    • 3.1 Seeded
  • 4 Nadzor kakovosti
  • 5 Omejitve
  • 6 Reference

Fundacija

Gre za gojišče kulture, ki se šteje za diferencialno, saj njegova uporaba omogoča razlikovanje med mikroorganizmi, ki lahko proizvajajo vodikov sulfid in tistimi, ki jih ne; poudarja tudi tiste, ki tvorijo indol iz triptofana tistih, ki ga ne tvorijo, in končno razlikujejo gibljivost od nepremičnih bakterij.

Vir napajanja

Kot vsako gojišče ima elemente, ki zagotavljajo potrebna hranila, tako da se lahko razvijejo nezahtevni mikroorganizmi. Te elemente predstavljajo peptoni in tripetína.

Razvoj mikroorganizma v okolju je bistvenega pomena za opazovanje prisotnosti ali odsotnosti značilnosti, ki jih ocenjuje ta medij.

Proizvodnja vodikovega sulfida

Črka S kratice SIM se nanaša na proizvodnjo vodikovega sulfida (H2S). Bakterije, ki lahko tvorijo vodikov sulfid, sprejmejo žveplo natrijevega tiosulfata.

Ko nastane H2S - brezbarvni plini - reagirajo z železovo soljo, ki je prisotna v mediju in tvorijo železov sulfid, jasno viden (črna oborina). Bakterije, ki ne tvorijo H2S, pusti sredino prvotne barve (bež).

Prisotnost črne oborine lahko ovira interpretacijo gibljivosti. Vendar pa je znano, da je večina enterobakterij, ki proizvajajo H2S so pozitivna gibljivost, kot so Salmonella, Proteus in Citrobacter. Poleg tega črna oborina, ki pokriva skoraj celoten medij, kaže na pozitivno gibljivost.

Indolsko usposabljanje

Druga črka kratice SIM je "I", ki predstavlja tvorbo indola.

V tem smislu, tripteína, poleg tega, da je vir hranila, izpolnjuje še eno temeljno funkcijo. Ta pepton je bogat z aminokislino, imenovano triptofan, zato lahko pokaže bakterije, ki proizvajajo triptofanazo.

Ta encim je odgovoren za striženje aminokisline triptofana s posledično tvorbo indola (brezbarvne snovi), piruvične kisline in amonija..

Zato je za prikaz te reakcije potrebno dodati razkrito snov (Ehrlichov reagent ali Kovacov reagent). Oba reagira z indolom in na površini agarja tvori obročasto rdeče-fuksijsko snov. Če se pojavi fuksijski obroč, se indolski test razlaga kot pozitiven.

Bakterije, ki nimajo tega encima, ne bodo tvorile obroča in se razlagajo kot negativni indolski test.

Pomembno je poudariti, da mora biti indolski test zadnji, ki ga je treba razlagati, ker ko je reagent dodan, medij postane moten, kar otežuje vizualizacijo gibljivosti..

Motilnost

Nazadnje črka "M" besede SIM pomeni gibljivost. Da bi lahko ovrednotili gibljivost, je ta medij strateško poltrdna, saj je ta značilnost bistvena za opazovanje, ali obstaja bakterijsko gibanje ali ne. Bakterije, ki imajo flagele, so tiste, ki dajejo ta pozitivni test.

Pozitivni test bo razviden, če opazimo motnost, tako v začetnem inokulumu kot okoli njega. Medtem ko se nemobilne bakterije razvijajo le v začetni inokulumski poti.

Priprava

Polovica SIM

Natehtamo 30 g dehidriranega medija in raztopimo v enem litru destilirane vode. Zmes pustimo stati 5 minut in nato segrevamo do vrelišča, pogosto mešamo, dokler se popolnoma ne raztopi..

Mešanico porazdelimo v epruvete z bombažnim pokrovom in 15 minut avtoklaviramo pri 121 ° C. Stojalo za cev odstranite iz avtoklava in pustite, da se strdi v pokončnem položaju, tako da je medij v obliki bloka..

Za shranjevanje ga hranite v hladilniku, dokler ga ne uporabite. Pripravljeni medij mora imeti končni pH 7,3 ± 0,2.

V času inokulacije medija mora biti pri sobni temperaturi. Barva medija je bež.

Kovaćev reagent

Izmerimo 150 ml amila ali izoamila ali butil alkohola. (Uporabite enega od treh omenjenih).

Raztopite 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Nato počasi dodamo 50 ml koncentrirane klorovodikove kisline.

Reagent, pripravljen za uporabo, je brezbarven ali svetlo rumene barve. Hraniti ga je treba v rumeni steklenički in shraniti v hladilniku. Ne uporabljajte, če ima temno rjavo barvo; ki označuje, da je poškodovan. Ta reagent ima prednost pri ravnanju z enterobakterijami.

Erlich reagent

Natehtamo 2 g p-dimetilaminobenzaldehida in raztopimo v 190 ml absolutnega etilnega alkohola in počasi premešamo s 40 ml koncentrirane klorovodikove kisline. Na enak način hranite Kovačev reagent. Ehrlichov reagent se bolj uporablja za nefermentacijske in anaerobne bakterije.

Uporabe

Sredstvo SIM se zelo uporablja v laboratorijih bakteriologije. Prednost je, da se v istem cevju opazijo tri bistvene značilnosti pri identifikaciji enterobakterij.

Poseljeno

Pravilen način sejanja tega medija je uporaba igle, s katero se vzame del čiste kolonije, ki jo je treba preučiti, in jo vstavi v sredino medija navpično. Izvesti je treba samo en potisk. Punkcija ne bi smela doseči dna cevi, pravilna stvar pa naj bi bila le dve tretjini globine.

Ne priporočamo ponavljanja inokuluma, ker lahko to povzroči napačne interpretacije pozitivne gibljivosti. Inokulirani medij se 24 ur inkubira v aerobiozi pri 37 ° C.

Končal je čas, ki ga opazimo, če je bila proizvodnja H ali ne2S in gibljivost se bere. Indol je nazadnje razkrit, dodamo 3 do 4 kapljice reagenta Ehrlich ali Kovac, nežno mešamo in interpretiramo..

Nadzor kakovosti

Kot kontrolo sterilnosti eno ali dve epruveti inkubiramo brez inokulacije v pečici pri 37 ° C 24 ur. Pričakuje se, da po tem času ne bo rasti ali spremembe barve.

Kot nadzor kakovosti se lahko uporabljajo certificirani znani sevi, kot so: \ t Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Pričakovani rezultati so: Escherichia coli H2S negativna, indolna in pozitivna gibljivost, Enterobacter aerogenes le pozitivna gibljivost, Salmonella typhimurium H2S in pozitivna gibljivost, z negativnim indolom. Proteus vulgaris vse pozitivno, medtem ko Klebsiella pneumoniae in Shigella sonnei vsi negativni.

Omejitve

-Nekateri sevi. \ T Morganella morganii, med drugimi sevi lahko v tem mediju nastane rjavkast pigment zaradi proizvodnje melanina, zato ga ne smemo zamenjevati z oborino železovega sulfida. Pri neizkušenih strokovnjakih lahko ta situacija povzroči napačne pozitivne rezultate pri interpretaciji H testa2S.

-Stroge aerobne bakterije rastejo samo na površini cevi, zaradi česar je težko razumeti gibljivost.

Reference

  1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Na voljo na: bd.com
  2. Laboratoriji Neogen SIM Srednje. Na voljo na: foodsafety
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Srednje. 2009. Na voljo na: http://f-soria.es
  4. Laboratorij Brizuela-Lab SIM Srednje. Na voljo na: .brizuela-lab.com
  5. Laboratoriji Britania. SIM Srednje. 2015. Na voljo na: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uvodnik Panamericana S.A. Argentina.